8_真核基因表达调控要点.ppt

（2）磷脂酰肌醇途径 4，5-二磷酸磷脂酰肌醇（PIP2） 磷脂酶C（PLC-β） 1，4，5-三磷酸肌醇（IP3） 二酰基甘油（DAG） （3）酪氨酸蛋白激酶途径（PTK） 分类： 跨膜受体型PTK和胞质非受体型PTK 细胞外信号 EGF、PDGF等 具PTK活性的受体 GRB2 P SOS P Ras-GTP P Raf 调节其他蛋白活性 MAPKK MAPK P P P 细胞核 反式作用因子 调控基因表达 细胞膜 二聚化 目 录 跨膜受体型PTK 胞质非受体型PTK： 受体分子缺乏酪氨酸蛋白激酶活性，但它们能借助细胞内的一类具有激酶结构的连接蛋白JAK完成信息转导。 2、胞内受体介导的信息传递 细胞内受体的本质 是激素激活的基因 调控蛋白 3、真核生物基因转录后加工的多样性 真核生物的基因可以按其转录方式分为两大类：即简单转录单位和复杂转录单位。 (1) 简单转录单位。这类基因只编码产生一个多肽，其原始转录产物有时需要加工，有时则不需要加工。这类基因转录后加工有3种不同形式： (2) 复杂转录单位。含有复杂转录单位的主要是一些编码组织和发育特异性蛋白质的基因，它们除了含有数量不等的内含子以外，其原始转录产物能通过多种不同方式加工成两个或两个以上的mRNA。 ①利用多个5’端转录起始位点或剪接位点产生不同的蛋白质。 ②利用多个加多聚（A）位点和不同的剪接方式产生不同的蛋白质。 ③虽无剪接，但有多个转录起始位点或加多聚（A）位点的基因。 （二）翻译水平的调控 1、mRNA的稳定性与基因表达调控 RNA interference(RNAi) 通过双链RNA的介导特异性地降解相应序列的mRNA, 从而导致转录后水平的基因沉默。 1990, Jorgensen et al, 材料：牵牛花 目的：得到紫色更深的花 方法：构建强启动子的苯基苯乙烯酮合酶表达载 体，导入牵牛花 结果：花变得更白。 分析：内源和外源的苯基苯乙烯酮合酶基因的表 达都被抑制。称之为共抑制（co-suppression） 1998，Fire et al 材料：线虫 目的：消除线虫第一次分裂的不对称性 方法：注射经过纯化的由T4和T7 RNA聚合酶体外转录得到的ss-RNA; 注射经过纯化后的ds-RNA 结果：前者只引起微弱的抑制作用；后者却得到比前者高两个数量级的抑制效果。 分析：RNA Interference(RNAi), Nature, 1998, 391:806-811 向细胞中加入双链RNA,能够引起含有该双链区域(或者非常相似)的目标基因的沉默,该发现报道于1998年,并引起极大的轰动.. 在动植物体中都有此种现象的存在. How dsRNA can switch off expression of a gene ? Dicer 是一个 RNAseⅢ-like enzyme 能够识别和水解长的双链RNA. 水解产物是短小的双链碎片. These short RNAs (or short interfering RNAs, siRNAs) 抑制了与其同源基因的表达,通常有三种机制: 破坏目标mRNA 抑制目标mRNA的翻译 对目标基因启动子修饰,以使得该启动子沉默 该机制包含一个复合体,称为RISC (RNA-induced silencing complex). RNA silencing RNAi 引起的基因沉默是非常有效的. 即使是极其微量的dsRNA 足以引起目标基因的彻底关闭. Why the effect is so strong ? 可能涉及到一个依赖于RNA的RNA聚合酶 RNA-dependent RNA polymerase, 它对此效应很有关系. RNAi的效应可以穿过细胞界限，在不同细胞间长距离传递和维持。 此外,还有另外一种类型的小分子RNA, called microRNAs ,是真核生物产生的内源的天然的小分子RNA,它们对基因的表达调控为生物正常发育所需 (miRNAs), 抑制植物和蠕虫中的基因表达. 通常, miRNAs 的表达具有时空特异性,与发育相关. RNAi的最先进化的机制可能源于生物的自我保护机制, 避免病毒对其的感染 现在RNAi技术已经被广泛应用于真核生物中去沉默一个给定的基因,这是一个非常有效的研究基因功能的手段和工具 . 2、 蛋白质因子的修饰与翻译起始调控 用兔网织红细胞粗抽提液研究蛋白质合成时发现，如果不向这一体系中添加氯高铁血红素，网织红细胞粗抽提液中的蛋白质合成抑制剂HCI就被活化，蛋白质合成活性在几分钟之内急剧下降，很快就彻底消失。