ELISA2-乙肝两对半5要点.pptVIP

ELISA-2 （乙肝两对半的检测） 临床免疫学教研室 邓念华 【目的要求】 1.掌握乙肝两对半的检测原理及操作过程； 2.熟悉影响乙肝两对半检测的因素； 3.进一步熟悉酶标仪及洗板机使用； 4.了解乙肝两对半的临床意义。 【原理】 项 目 表面抗原（HBsAg） 表面抗体（抗-HBs） e抗原（HBeAg） 抗e抗体（抗-HBe） 核心抗体（抗-HBc） 检 测 原 理 双抗体夹心法 双抗原夹心法 双抗体夹心法 竞争抑制法 竞争抑制法 【器材】 SM-3型自动化酶免分析仪 ZMX-988B型全自动酶标洗板机 微量加样器 吸头等 【试剂】 HBsAgELISA试剂盒 HBsAbELISA试剂盒 HBeAgELISA试剂盒 HBeAbELISA试剂盒 HbcAbELISA试剂盒 【标本】 待测血清 【操作步骤】 准备：试剂盒各组份在37℃平衡30min； 配洗涤液：用纯化水按1:25将浓缩洗液稀释； 加样品：每孔加入待测样品75ul/孔，同时设置阳性对照、阴性对照，空白对照（不加样品），轻轻振荡混匀； 孵育：贴上封膜，37℃反应60min; 加酶结合物：每孔加入50ul/孔（空白对照不加），震荡10秒钟； 表面抗原检测(双抗体夹心法) 孵育：贴上封膜，37 ℃反应30min; 洗板：洗板机5次，最后一次尽量扣干； 显色：先加显色液A 50ul，再加入显色液B 50ul，贴上封膜，37℃反应30min(避光)； （注：显色从加入第一滴显色液B开始计时） 终止：加终止液50ul； 判读：终止反应后10min内完成。(450nm处测定吸光度)。 结果判断及解释 COV=2.1×OD阴性对照 阳性：OD样品≥COV 阴性：OD样品＜COV 检测有效性 OD阴性对照≤0.10， OD阳性对照≥1.0 OD空白对照≤0.04（双波长检测） 准备：试剂盒各组份在37℃平衡30min； 配洗涤液：用纯化水按1:25将浓缩洗液稀释； 加样品：每孔加50ul，同时设阳性对照、阴性对照和空白对照（不加样品）； 加酶结合物：每孔50ul（空白对照不加）； 孵育：贴上封膜，37 ℃反应30min； 表面抗体检测(夹心法) 洗板：洗板机5次，每次洗液在孔中滞留时间10-15s，并注满反应微孔； 显色：先加显色液A 50ul，再加入显色液B 50ul，贴上封膜，37℃反应15min(避光)； （注：显色从加入第一滴显色液B开始计时） 终止：加终止液50ul； 判读：终止反应后10min内完成。(450nm处测定吸光度) 结果判断及解释 COV=2.1 × OD阴性对照（ OD阴性对照低于0.05按0.05计算） 阳性：OD样品≥COV 阴性：OD样品＜COV 检测有效性 OD阴性对照≤0.10，OD阳性对照≥1.0 OD空白对照≤0.015（双波长检测） 准备：试剂盒各组份在37℃平衡30min； 配洗涤液：用纯化水按1:25将浓缩洗液稀释； 加样品：每孔50ul，同时设阳性对照、阴性对照和空白对照（不加样品）； 加酶结合物：每孔50ul（空白对照不加）； 孵育：贴上封膜，37 ℃反应30min； e抗原检测(夹心法) 洗板：洗板机5次，每次洗液在孔中滞留时间10-15s，并注满反应微孔； 显色：先加显色液A50ul，再加入显色液B50ul，贴上封膜，37℃反应15min(避光)； （注：显色从加入第一滴显色液B开始计时） 终止：加终止液50ul； 判读：终止反应后10min内完成。(450nm处测定吸光度)。 结果判断及解释 COV=2.1 × OD阴性对照（ OD阴性对照低于0.05按0.05计算） 阳性：OD样品≥COV 阴性：OD样品＜COV 检测有效性 OD阴性对照≤0.10，OD阳性对照≥1.0 OD空白对照≤0.015（双波长检测） e抗体检测(竞争抑制法) 准备：试剂盒各组份在37℃平衡30min； 配洗涤液：用纯化水按1:25将浓缩洗液稀释； 加样品：每孔50ul，同时设阳性对照、阴性对照和空白对照（不加样品）； 加酶结合物：每孔50ul（空白对照不加）； 孵育：贴上封膜，37 ℃反应30min； 显色：先加显色液A 50ul，再加入显色液B 50ul，贴上封膜，37℃反应15min(避光)； （注：显色从加入第一滴显色液B开始计时） 终止：加终止液50ul； 判读：终止反应后10min内完成。(450nm处测定吸光度)