第八章吸光光度法解决方案.pptVIP

722型分光光度计 单光束 非扫描型 Varian Cary 1E 紫外可见分光光度计 可消除光源不稳定误差以及样品池的差异 §8-3 显色反应和显色条件选择 一、显色反应和显色剂 　　在光度分析中，将试样中被测组分转变成有色化合物的 化学反应叫显色反应。显色反应可分为两大类，即配位反应和 氧化还原反应，而配位反应是最主要的显色反应。与被测组分 生成有色物质的试剂称为显色剂。同一被测组分常可与若干种 显色剂反应，生成多种有机化合物。 选择显色反应的一般标准： （一）灵敏度高 　灵敏度高的显色反应有利于微量组分的测定。摩尔吸光系数ε的大小是显色反应灵敏度高低的重要标志。一般来说，当ε值为104-105时，可认为该反应灵敏度较高。P247，从Cu2+与三种显色剂反应的ε值判断，除氨外，其它两个显色反应的灵敏度都较高。 （二）选择性好 一种显色剂最好只与一种被测组分起显色反应，但这种试剂实际上非常少，可以通过掩蔽干扰离子或选择显色剂与被测组分和干扰离子生成的有色化合物的吸收峰相隔较远而获得好的选择性。 显色剂的选择原则: 组成恒定、配合物稳定、显色剂吸收波长与配合物吸收波长相差大（??max60 nm）等。 ——提高灵敏度和选择性 例： 浅黄 无色 血红 （三）显色剂在测定波长处无明显吸收 　　这样可使试剂空白一般较小。 （四）有色化合物的组成要恒定，化学性质要稳定 这样可以保证在测定过程中吸光度基本不变。 二、显色条件的选择 显色反应能否满足光度法的要求，除了主要与显色剂的性质有关系外，控制好显色反应的条件也是十分重要的。显色条件包括显色剂用量、酸度、显色温度、显色时间及干扰的消除。 （一）显色剂的用量 M(被测组分)+R（显色剂）= MR（有色化合物） 　　为了使显色反应尽可能进行完全，加入适当过量的显色剂是必要的。但也不能过量太多，否则会引起副反应，对测定反而不利。在实际工作中，显色剂的适宜用量是通过实验求得的。固定被测组分的浓度和其它条件，分别加入不同量的显色剂，测量吸光度，做吸光度 – 显色剂用量曲线。一般有三种情况，见P248，图9-14，其中（a）最为常见。 　　在a-b范围内曲线平直，吸光度出现稳定值，因此可在a-b间选择合适的显色剂用量。 （二）溶液的酸度 　　　　　溶液酸度对显色反应的影响可从金属离子、显色剂及有色配合物三方面考虑。 　　大部分高价金属离子都易水解，显然，金属离子的水解，对于显色反应的进行是不利的，故溶液的酸度不能太低。 显色剂多是有机弱酸，溶液的酸度影响着显色剂的离解，并影响显色反应的完全程度。此外，许多显色剂本身就是酸碱指示剂，溶液的酸度对显色剂本身的颜色会产生改变。 溶液的酸度对有色配合物的组成及稳定性也有影响。因此，某一显色反应最适宜的酸度可通过实验来确定。固定待测组分及显色剂浓度，改变溶液pH，测定其吸光度，做吸光度-pH关系曲线，曲线平坦部分对应的pH为适宜的酸度范围。 （三）显色温度 　　　合适的显色温度也必须通过实验确定，做A-T曲线。 （四）显色时间 　　　 有些显色反应较慢，需放置使其显色完全。有些显色配合物不够稳定，放置后会产生部分分解，导致吸光度降低，因此适宜的显色时间必须通过实验来确定。从加入显色剂计算时间，每隔几分钟测定一次吸光度，绘制A-t曲线，来确定适宜的时间。 （五）干扰的消除 　　　主要有三种：利用掩蔽反应、控制酸度、分离干扰离子。 三、显色剂 　　　　 　　 四、三元配合物 　　　　 显色剂主要分为无机显色剂和有机显色剂两大类，其中有机显色剂由于大多与金属离子生成极其稳定的鳌合物，显色反应的选择性和灵敏度都较无机显色反应高，因而广泛地应用于吸光光度分析中。这部分内容可参考P249－251。 由于三元配合物具有独特的分析特性，因而在分析化学中得到了广泛的应用。 显色剂种类 无机（SCN-；MoO42-；H2O2） 有机 OO型： 磺基水杨酸 NN型： ON型： PAR S型: 双硫腙 OH COOH SO 3 H N N N N N O H OH N H N H N S N §8-4 吸光度测量条件的选择 　　　上节主要介绍了显色反应和显色条件的选择和控制对吸光光度法的影响，为使光度法有较高的灵敏度和准确性，还必须控制适当的吸光度测量条件。选择合适的测量条件，可从下面几个方面考虑： 一、入射光波长 入射光波长一般选择溶液具有最大吸收时的波长，以便获得较高的灵敏度。如果在最大波长处有干扰物质的强烈吸收，则可选择次强吸收峰，见p252，图9-15。 二 、参比溶液 为了使测得的