第十三章遗传工程.pptVIP

例如 RFLP （限制性片段长度多态性）法 ： 　①. 原理：限制性内切酶能识别并切割特异核苷酸序列。 　某位点核苷酸序列发生突变→有可能导致缺失或产生新的限制性酶切位点。 若突变只发生在同源染色体的一条 上，另一条正常，限制性内切酶酶切→ DNA片段带型可用于鉴别同源染色体的差异。 酶切后产生的DNA片段长度的差异， 称为限制性片段长度多态性　(restriction　fragment　length polymorphisms，RFLP)。RFLP差异具有共显性特点。 ②. 镰刀性贫血病的诊断： 　该病由β－球蛋白基因一个核苷酸突变（由GAG变成GTG)导致的，这个核苷酸改变也正好导致一个限制性酶切位点改变。 杂合体经酶切产生带型差异，识别该位点。 2004年3月1日，科学家宣布绘制完成首禽鸟类物种的基因组序列草图。 材料：红原鸡（鸡的远祖）。 　　完成单位：中国、美国、德国、英国、瑞典、荷兰等。 　　水平：总碱基数目约为10亿碱基对，该序列草图与人类基因组序列进行了并列比较（由美国华盛顿大学负责）。同时完成一张鸡遗传差异图谱（由中科院负责），对红原鸡、肉鸡（英）、蛋鸡（瑞典）、乌鸡（中）进行序列差别分析。 　　作用：鸡是研究低等脊椎动物和人类等哺乳动物的理想中介，因此在禽流感防治、改善家禽和人类健康等方面有明显应用价值。 　　解决方法：大规模序列测定前，构建基因组图谱可作为序列测定中制定测序方案的依据，以便锚定测知的核酸序列在染色体上的位置。 基因组中核苷酸顺序的测定方法： 　　利用现有DNA测序方法，每个测序反应通常只能得到800个核苷酸的序列。 　∴小基因组物种常用鸟枪射击法。 　　大基因组测序存在两个问题： 　??片段数(n)庞大，片段间连接和装配非常复杂，重叠数为2n2–2n； 　??基因组中相同或相似的重复序列在连接和装配时容易出错。 （2）连接酶 形成二脂键，1976年在T4中发现，现分离400多种，常用10多种，平齐末端必须用T4连接酶。 2、载体与目的基因重组 将目的基因与载体重组，用同一种限制酶切目的基因和载体→混合加入连接酶→重组DNA。 (1) 通过限制性内切酶的切割 和DNA连接酶的连接； (2)目标DNA分子 + 载体DNA，共价连接； (3)获得重组DNA分子。 （三）转移、筛选和表达 重组DNA分子引入宿主受体细胞→ 复制→ 建立无性繁殖系(clone)→ 并使外源基因在受体细胞中正常表达，翻译成蛋白质等基因产物、回收；或筛选出获得定向性状变异的个体。 1、转入受体细胞 细菌转化；转导；微型注射器登方法。 2、目的基因筛选 利用标记基因，如限制性内切酶用BamHI(液化淀粉芽孢杆菌中得到)，载体用PBR322（抗氨苄青霉素Apr和四环素Tcr）酶切点在Tcr基因内，Tcr→Tcs，目的基因插入Tcr基因内，即含目的基因的重组DNA为AprTcs，通过不同培养基筛选。 3、目的基因表达 目的基因表达，是否有合适的启动子，用外来基因的启动子；启动子与受体细胞的RNA聚合酶是否协调；外源DNA插入方向与转录方向是否一致。 第三节 遗传工程成果及应用 一、理论研究中应用 基因文库、测序、基因功能研究等 二、生产上应用 目前，基因工程研究发展迅速，已取得一系列重大突破。 基因工程技术已广泛用于工业、农业、畜牧业、医学、 法学等领域，为人类创造了巨大的财富。 具有生长激素的转基因鼠 一、 基因工程工业 最早应用基因工程生产人的蛋白质的方法是在细菌中表达人的胰岛素(1982)。 胰岛素是一种控制糖代谢的蛋白质激素。缺乏糖尿病，注射胰岛素。 现已在细菌中生产10多种 药品，例如表皮生长因子、人生长激素因子、干扰素、乙型肝炎工程疫苗等。 　　目前，酵母菌、植物悬浮细胞、植株和动物培养细胞均成功地应用于表达外源蛋白。 二、植物基因工程： 植物基因转化是指将外源基因转移到植物细胞内、并整合到植物基因组中稳定遗传和表达的过程，获得外源DNA的植物——转基因植物。 许多植物基因已经被分离、克隆。植物基因转化技术也得到不断发展和完善。 对照 抗虫稻 1996年全世界转基因植物种植面积为170万公顷，1997年为1100万公顷，1998年为2780万公顷，1999年达到3990万公顷，2000年达到4420万公顷，2001年达到5260万公顷，2002年达到5000万公顷。2006年1.02亿公顷（科学时报，国际服务组织（ISAAA）发布2006年度报告）。 2001年种植面积已超过100万公顷的作物有： 大豆（3330万hm2，占全世界转基因作物的63%，均为抗除草剂大豆）、玉米（980万hm2 ，占19% ）、棉花（6