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思考题总汇 Q1：DNA双链退火与PCR中退火的不同 DNA变性是指核酸双螺旋碱基对的氢键断裂，双链变成单链，从而使核酸的天然构象和性质发生改变。变性时维持双螺旋稳定性的氢键断裂，碱基间的堆积力遭到破坏，但不涉及到其一级结构的改变。凡能破坏双螺旋稳定性的因素，如加热、极端的pH、有机试剂甲醇、乙醇、尿素及甲酰胺等，均可引起核酸分子变性。 　　变性DNA常发生一些理化及生物学性质的改变： 1）溶液粘度降低。DNA双螺旋是紧密的刚性结构，变性后代之以柔软而松散的无规则单股线性结构，DNA粘度因此而明显下降。? 2）溶液旋光性发生改变。变性后整个DNA分子的对称性及分子局部的构性改变，使DNA溶液的旋光性发生变化。 3）增色效应(hyperchromic effect)。指变性后DNA溶液的紫外吸收作用增强的效应。DNA分子中碱基间电子的相互作用使DNA分子具有吸收260nm波长紫外光的特性。在DNA双螺旋结构中碱基藏入内侧，变性时DNA双螺旋解开，于是碱基外露，碱基中电子的相互作用更有利于紫外吸收，故而产生增色效应。 Q1：DNA双链退火与PCR中退火的不同 退火在PCR中，是指模板双链DNA经热变性、双螺旋解开成单链后，通过缓慢冷却到55℃左右，使引物（即具有互补碱基的RNA片段）与该模板DNA单链重新配对，形成新的双链分子的过程。 退火能在互补的DNA或RNA之间形成双链DNA分子、双链RNA分子或RNA-DNA杂交分子，受温度、时间、DNA浓度、DNA顺序的复杂性等因素的影响。 Q2：在分子水平上解释二次生长现象（乳糖操纵子） 结构： 大肠杆菌的乳糖系统操纵子，β-半乳糖苷酶，半乳糖苷渗透酶，半乳糖苷转酰酶的结构基因以LacZ（z）， Lac Y（y），Lac A（a）的顺序分别排列在染色体上，与z相邻，与y相对的一侧有操纵基因Lac O（o）， 更前面有启动基因Lac P（p），操纵子（乳糖操纵子）就是这样构成的。决定乳酸系统阻遏物结构的调节基因Lac I（i）处于和p相邻的位置上。 Q2：在分子水平上解释二次生长现象（乳糖操纵子） :1,乳糖操纵子的组成:大肠杆菌乳糖操纵子含Z,Y,A三个结构基因,分别编码半乳糖苷酶,透酶和半乳糖苷乙酰转移酶,此外还有一个操纵序列O,一个启动子P和一个调节基因I. 2,阻遏蛋白的负性调节:没有乳糖存在时,I基因编码的阻遏蛋白结合于操纵序列O处,乳糖操纵子处于阻遏状态,不能合成分解乳糖的三种酶;有乳糖存在时,乳糖作为诱导物诱导阻遏蛋白变构,不能结合于操纵序列,乳糖操纵子被诱导开放合成分解乳糖的三种酶.所以,乳糖操纵子的这种调控机制为可诱导的负调控. 3,CAP的正性调节:在启动子上游有CAP结合位点,当大肠杆菌从以葡萄糖为碳源的环境转变为以乳糖为碳源的环境时,cAMP浓度升高,与CAP结合,使CAP发生变构,CAP结合于乳糖操纵子启动序列附近的CAP结合位点,激活RNA聚合酶活性,促进结构基因转录,调节蛋白结合于操纵子后促进结构基因的转录,对乳糖操纵子实行正调控,加速合成分解乳糖的三种酶. 4,协调调节:乳糖操纵子中的I基因编码的阻遏蛋白的负调控与CAP的正调控两种机制,互相协调,互相制约. Q3：溶源、溶菌的区别 溶源性噬菌体感染细菌后，将自身DNA整合到细菌的染色质中，随细菌的复制而复制。被感染的细菌，原有的染色质改变了。故称“溶原”。病毒（包括噬菌体）进入宿主细胞，其遗传物质整合到宿主遗传物质上，随代遗传，就是溶原性了， 而其进入宿主细胞，并进行外壳的装配并最终破菌释放，就是溶菌性反应。前者不破坏宿主，后者毁灭宿主，前者可在随宿主复制中转变为后者性质。 Q4：线粒体中蛋白质的代谢、运输 线粒体的蛋白合成能力有限，大量线粒体蛋白在细胞质中合成，定向转运到线粒体。这些蛋白质在在运输以前，以未折叠的前体形式存在，与之结合的分子伴娘（属hsp70家族）保持前体蛋白质处于非折叠状态。 通常前体蛋白N端有一段信号序列称为导肽、前导肽或转运肽，完成转运后被信号肽酶切除，就成为成熟蛋白，这种现象就叫做后转译 Q4：线粒体中蛋白质的代谢、运输 线粒体前体蛋白信号序列的特点是： ①多位于肽链的N端，由大约20个氨基酸构成； ②没有带负电荷的氨基酸，形成一个两性α螺旋，带正电荷的氨基酸残基和不带电荷的疏水氨基酸残基分别位于螺旋的两侧，现在认为这个螺旋与转位因子的识别有关； ③对所牵引的蛋白质没有特异性要求，非线粒体蛋白连接上此类信号序列，也会被转运到线粒体。此外有些信号序列位于蛋白质内部，完成转运后不被切除，还有些信号序列位于前体蛋白C端，如线粒体的DNA解旋酶 Hmil。 Q5：怎样处理氯化汞废液？ 由于各种价态汞的毒性都很强，在对含汞废液处理时，不能将含汞废液经简单化学处理后直接排入下水道