生物应用[精选].ppt

1、底物 2、pH条件 3、培养时间 4、培养温度 等一切能提高目的微生物相对生长速度的手段，培养（固体、液体；分批连续）后使目的微生物在种群中占优势。 自然界中有目的微生物分离的原则 定向培养的富集方法 富集培养 Enrichment Culture 荷兰微生物学家 Martinus Beijerinck 采用富集培养方法首次分离得到固氮菌Azotobacter 一株以甘油为底物产二羟丙酮(DHA)微生物菌种的筛选及鉴定 种子富集培养基(％)：甘油10.0, 酵母膏1.0 徐美娟 饶志明 沈 微 方慧英 诸葛健 江南大学工业生物技术教育部重点实验室 微生物学通报 2008 产酯酶微生物菌种的筛选研究 细菌富集培养基制备 　牛肉膏20. 0 g/ L , 葡萄糖20. 0 g/ L , (NH4 ) 2SO4 5. 0 g/ L , K2HPO4 5. 0 g/ L , MgSO4 ·7H2O 1. 0 g/ L ,FeSO4·7H2O 0. 01 g/ L ,NaCl 0. 5 g/L ,调pH 至7. 2 , 灭菌 后加入三醋酸甘油酯10. 0 mL/ L 和乳酸乙酯10. 0 mL/ L 。 霉菌富集培养基 酵母膏20. 0 g/ L ,葡萄糖20. 0 g/ L , K2HPO4 2. 0 g/ L ,MgSO4·7H2O 0. 5 g/ L ,FeSO4·7H2O 0. 01g/ L ,自然pH 值, 灭菌 后加入三醋酸甘油酯30. 0 mL/L 富集方法 　取土壤样品1g 或污油水样2 mL 加入装有25mL 富集培养基的250 mL 三角瓶中,在32 ℃下,150r/ min 摇瓶发酵培养。筛选细菌富集48 h ,霉菌富集96 h 从产物角度出发 在培养时以产物的形成有目的的设计培养基 利用简单、快速的鉴定方法，如抗生素 从形态的角度 菌落的外观形态，是微生物的一个重要表征。如多糖产生菌在适当的培养基上生长，从具有粘液性的菌落外观上就可以初步识别。 自然界中有目的微生物分离的原则 四、菌落的选出 产酯酶微生物菌种的筛选研究 快速平板显色分离方法 将富集过的培养液用无菌水稀释,分别涂布在细菌和霉菌初筛平板上。32 ℃培养,相隔6 h 定期观察结果,将具有变色圈的菌落选出 鄢洪德, 汪　钊, 李光伟 浙江工业大学生物与环境工程学院 工业微生物 2007 实例：碱性纤维素酶产生菌的筛选 采样（造纸厂） →80度30分钟处理 文献:产生菌为中性芽孢杆菌，嗜碱芽孢杆菌、放线菌及霉菌 0.0075%曲利本蓝＋1%CMC（羧甲基纤维素），pH10.5 培养3～4天，选择有凹陷圈的菌落 从285个土样中获得62株 26株为组成型 36株为诱导型 ↓ 自然界中有目的微生物分离的原则 例：醛肟水解酶的筛选 --Journal of biotechnology 94(2002) 培养基中含0.05% of Z-PAOx 每隔2-3天移去一半培养物，补充新鲜培养基 不断分析样品，2-3个月后Z-PAOx降低后，稀释分离菌落 自然界中有目的微生物分离的原则 分子生物学的实验手段，在微生物鉴别及特定目标产物 的筛选方面发挥了着越来越重要的作用。如:16SRNA同 源性分析，基因序列分析及DNA/DNA杂交技术等 目前土壤中能够培养的微生物不到总数的1%。微生物的 多样性及资源的开发仍然是今后若干年的研究重点。 2002,陈文新（科学院院士） In contrast to this traditional approach, modern molecular biology techniques allow for DNA library expression screening, which also enables access to enzymes of `nonculturable organisms. By this strategy, for instance, the company Diversa (San Diego, CA, USA) identised 120 unique esterases/lipases from only 16% of the total DNA obtained from an alkaline soil sample. FEMS Microbiology Reviews 26 (2002) 自然界中有目的微生物分离的原则 五、目的微生物富集方法的研究进展 16S rRNA技术 rRNA存在于所有的生物中, rRNA是细菌和真核细胞核糖体的基本组成部分,编码细菌rRNA的基因是按