6协和讲20091012-简.ppt

氨基酸分析方法 柱前衍生法： ① PITC衍生法 ② OPA-FMOC衍生法 ③ AQC衍生法 ④ DNFB衍生法 柱后衍生法: ① 茚三酮衍生检测法 ② OPA衍生检测法 直接分析法： ① 电化学检测法 ② 蒸发光散射检测法 （五）肽、蛋白、酶类药物 酶类药物的鉴别：酶的化学本质为蛋白质，而且具有专一性作用于合成底物或天然底物的特性。 SDS法测定分子量、鉴别对照品与供试品的迁移率是否一致，如降纤酶。 SE-HPLC和RP-HPLC法鉴别对照品与供试品的保留时间是否一致，如门冬酰胺酶。 凝块裂解法鉴别溶栓作用，如一些溶栓酶； 利用酶作用于合成的生色底物产生颜色来鉴别，如糜蛋白酶、胰蛋白酶。抑肽酶是蛋白酶抑制剂，它不裂解胰蛋白酶的底物（对甲苯磺酰L-精氨酸甲酯盐酸盐），故不产生颜色反应。 酶活性测定：一般以其生物学作用为基础，选择特定的底物，在一定的条件下测定。 酶活性测定： 纤溶酶原激活剂（UK、SK、tPA）——凝块裂解法 这些酶能激活纤维蛋白溶酶原，使其转化为纤溶酶，纤溶酶可将蛋白块（由纤维蛋白在凝血酶的作用下形成）水解成可溶性的小分子多肽。当凝块溶解时，凝块中的气泡均上升，记录气泡上升的时间，将标准品的时间与浓度单位取双对数后，再进行线性回归，将样品的时间取对数，带入标准曲线，即可查得样品的效价单位。 葡萄糖脑苷脂酶——合成底物法 利用GCR底物类似物p-硝基苯基-β-D-吡喃葡糖苷，经r-GCR降解后产生生色基团p-硝基苯基（pNP），在波长400nm处有吸收，通过一定反应时间内该吸收度的变化可计算出酶活性。通常定义37℃下1分钟内水解1μmol底物所需的r-GCR量为一个活性单位（1 U）。 精氨酸酶：精氨酸经精氨酸酶、尿素酶两步作用产生氨，利用?-酮戊二酸、谷氨酸脱氢酶、?-NADPH吸收产生的氨，使得?-NADPH浓度降低，然后测定?-NADPH在340nm处吸光度的变化，计算精氨酸酶活性。 尿酸氧化酶：尿酸在尿酸氧化酶的作用下分解成为尿囊素，尿酸最大紫外吸收波长为292nm，而尿囊素为224nm，在一定范围内尿酸在292nm的吸收值与其浓度成正比，可用分光光度法进行尿酸的定量测定。酶活性（EAU）单位定义：30℃，pH8.9，每分钟将1μmol尿酸氧化为尿囊素所需的酶量。 葡萄糖脑苷脂酶（伊米苷酶）：伊米苷酶可水解合成底物p-硝基苯基-β-D-吡喃葡糖苷（pNP-Glc），产生的生色基团p-硝基酚在碱性pH条件下，其浓度可通过400nm波长下的光吸收度来测定。1个活性单位（U）的伊米苷酶定义为：37°C下1分钟内水解1?mol底物所需的伊米苷酶量。 止血酶类：血浆凝血机制是一系列酶促生化反应的终点，其大体上可分为三个主要阶段： 1.因子X激活成Xa； 2.因子Ⅱ（凝血酶原）激活成Ⅱa（凝血酶） 3.因子Ⅰ（纤维蛋白原）转变成Ⅰa（纤维蛋白） Xa形成在加速止血和后期止血中起重要作用，因为激活的Xa因子使凝血酶形成的速度加快约20000倍，从而达到迅速止血的作用。 凝血因子X激活剂活性测定基于血浆凝固时间。记录人-枸橼酸抗凝血浆的凝固时间，并根据标准曲线回归方程，计算供试品溶液的活性单位。 * * 生化药物分析及新进展 杨化新 标准化研究中心 中国药品生物制品检定所 内 容 提 纲 一、生化药品概述 二、生化药物分析与质控特点 三、各类生化药物分析概况 四、生化药物分析研究热点 一、生化药品概述 《中华人民共和国药品管理法》（1984年9月20日第五届全国人大常委会第7次会议通过。2001年2月28日第九届全国人大常委会第20次会议修订， 2001年12月1日起施行。） 第十章第一百零二条 药品，是指用于预防、治疗、诊断人的疾病，有目的地调节人的生理机能并规定有适应症或者功能主治、用法和用量的物质，包括中药材、中药饮片、中成药。化学原料药及其制剂、抗生素、生化药品、放射性药品、血清、疫苗、血液制品和诊断药品等。 辅料，是指生产药品和调配处方时所用的赋性剂和附加剂。 第二章第十条 药品必须按照国家药品标准和国务院药品监督管理部门批准的生产工艺进行生产，生产记录必须完整准确。 第二章第十一条 生产药品所用的原料、辅料，必须符合药用要求。 第二章第十二条 药品生产企业必须对其生产的药品进行质量检验；不符合国家药品标准的，不得出厂。 生化药品的定义与分类