酶联免疫吸附试验-生20140113探析.ppt

实验一 酶联免疫吸附试验(ELISA) 抗原 抗体 抗原抗体反应 Hv Lv Hc Lc Ⅰ 抗原抗体反应的特征 “Lock and Key” 模式: 高度特异性 非共价键结合 氢键、静电引力、范德华力、疏水键 可逆性结合 亲和力；亲合力 抗原抗体比例 抗原的理化性质 温度: 37℃~56℃ PH值: 6~8 离子浓度: 0.9% NaCl Ⅱ 影响抗原抗体反应的因素 凝集反应 沉淀反应 补体结合反应 中和反应 Ⅲ 经典抗原抗体反应 免疫标记技术 定义： 将抗原-抗体反应与标记技术相结合，用放射性同位素、酶或荧光素标记的已知抗体或抗原，通过检测标记物，间接测定未知的抗原或抗体。 分类： 放射免疫测定法：131I，32P 免疫荧光技术：FITC(异硫氰酸荧光素)，PE(藻红蛋白) 免疫酶测定法：HRP，AP 免疫酶测定法(Enzyme ImmunoAssay,EIA) 用酶标记的抗原或抗体进行的抗原抗体反应。 辣根过氧化物酶(HRP)，碱性磷酸酶(AP) 特点： 高度特异性：保持抗原抗体反应的特异性 高灵敏度：酶催化底物显色的高效性，pg水平微量检测 定性定量检测：反应液颜色深浅或光密度值 分类： 酶联免疫吸附试验：可溶性抗原或抗体 酶免疫组化法： 组织中或细胞表面的抗原。 酶联免疫吸附试验(Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay,ELI