酶联免疫吸附试验探析.ppt

酶联免疫吸附试验（ELISA） 酶联免疫吸附试验 (Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay,ELISA) 基本原理： 把抗原或抗体结合到某种固相载体表面，并保持其免疫活性；并将抗原或抗体与某种酶连接成酶标记抗原或抗体，它即保留了免疫活性，又保留了酶的活性；测定时将受检样品（含待测抗原或抗体）和酶标记抗原或抗体按一定程序与结合在固相载体上的抗原或抗体反应形成抗原抗体复合物；用洗涤的方法将固相载体上形成的抗原抗体复合物与其他物质分开，结合在固相载体上的酶量与标本中受检物质的量成一定比例；加入底物后，底物被固相载体上的酶催化变成有色产物，通过定性或定量检测有色产物量即可确定样品中待测物质含量。 双抗体夹心法 基本原理： 双位点一步法 要求：抗原分子上存在两个不同且空间距离较远的决定簇。 原理：使用两种单克隆抗体，即包被使用一种抗体，酶标记使用另一种抗体。测定时将含待测抗原标本和酶标抗体同时加入进行反应，两种抗体腹部干扰，经过一次温育和洗涤后，即可加入底物进行显色测定。 注意：当待测抗原浓度过高时，过量抗原可分别同固相抗体和酶标抗体结合而抑制夹心复合物的形成，出现钩状效应，显色降低，严重时可出现假阴性结果。 竞争法 原理： 竞争法 特点： ? 酶标记抗原与样品或标准品种的非标记抗原具有相同的