精选课件第四章 反相微胶团萃取技术.pptVIP

第四章 反相微胶团萃取技术（Reversed Micelles Extraction） 反胶束的优点 反胶束萃取优点：具有成本低、溶剂可反复使用、萃取率和反萃取率都很高等突出的优点。此外，反胶束萃取还有可能解决外源蛋白的降解，即蛋白质(胞内酶)在非细胞环境中迅速失活的问题，而且由于构成反胶束的表面活性剂往往具有溶解细胞的能力，因此可用于直接从整细胞中提取蛋白质和酶。 一、反胶束萃取原理和制备 1 　基本原理 表面活性剂溶于水中，当其浓度超过临界胶束浓度(CMC) 时，便形成聚集体,称为正常胶束；表面活性剂溶于有机溶剂，当浓度大于临界胶团浓度时，会在有机相中形成聚集体,称为反胶束。反胶束中极性头朝内，非极性尾朝外排列形成亲水内核，称为“水池”。 萃取时，待萃取的原料液以水相形式与反胶束体系接触，调节各种参数，使其中要提取的物质以最大限度转入反胶束体系(前萃取) ，后将含该物质的前萃液与另外一个水相接触。 再次调节pH、离子强度等参数分出要提取物质。 2 　体系性质 反胶束体系的性质常用参数W0 (或R) ，θ，与N 来表示，其中W0为水与表面活性剂的摩尔比，θ是增溶水相对总体积的浓度，N是组成每个反胶束微粒的表面活性剂分子个数(聚焦数)。 当W0一定时，θ与N 决定了胶束微粒的相对浓度，其中最重要的参数为W0 。 W0 反映的是反相微胶团中的水分含量，是非极性溶剂中的水浓度和表面活性剂浓度之比。即： W0 =[H2O]/[表面活性剂]。 W0 越大反相微胶团内水分越多，形成的反相微胶团半径越大，能溶解的水溶性成分就越多。因此， W0 大小可以反映出反相微胶团的大小和溶解能力。 3 　增溶动力学 蛋白质在反胶束中增溶，普遍认为动力是蛋白质表面的电荷与形成反胶束内表面的表面活性剂极性头之间的静电引力，如AOT(丁二酸-2-乙基已基酯磺酸钠) / 异辛烷形成的反胶束中，AOT是阴离子表面活性剂。当原料样pH pI 时，蛋白质带正电，则增溶大，pH pI 则增溶小。离子强度也有类似现象，很多研究表明蛋白质与表面活性剂间的疏水作用也有很大作用。 反胶束中，酶的动力学与水中相似，只是由于酶与表面活性剂作用，底物分配和交换，因而Km(米氏常数) Kcat (转换数) 是复杂的多变量函数。 4 　制备方法 目前常用转移法、注入法、溶解法制备反胶束体系。 相转移法：将含有生物大分子的水相与溶解有表面活性剂的有机相接触，缓慢搅拌，在形成反相微胶团的同时，其中的生物大分子就转入到反相微胶团中，直到萃取处于平衡状态。见书P37图4-4a。 注入法：将含有生物大分子的水溶液注入到含有表面活性剂的有机相中，从而实现萃取过程。见书P37图4-4b。 溶解法：常用于固体粉末中的生物大分子或不溶于水的生物大分子的分离。操作过程是先制备好含水（w0=3~30左右）的反相微胶团的有机溶液，然后把含有生物大分子的固体粉末加入并搅拌，生物大分子慢慢的就可进入到反相微胶团内的水中心而达到分离萃取效果。见书P37图4-4c。 二、反胶束溶液形成的条件和特性 反微团： 表面活性剂的极性头朝内，疏水的尾部向外，中间形成极性的“核” 反相微胶团的形成、大小、形状，与表面活性剂的种类、浓度以及操作时的温度、压力等因素都有关系。 三、影响反胶束萃取蛋白质的主要因素 四、反胶束萃取技术在食品科学上的研究 1 酶学研究中的应用 在生物催化体系中，酶的活性与稳定性是实现酶催化反应并获得高产率生成物的重要条件。酶的活性与稳定性受到诸如底物种类、底物浓度、酶浓度、pH、温度、金属离子、缓冲液种类以及浓度等因素的影响。影响的结果可使酶活力大幅度升高或失去活性。这是酶的本质与作用特点所决定的。利用反胶束就可以解决这个问题，反胶束体系是光学透明的热力学稳定的体系，可以很好地模拟酶的天然环境，并有利于用光学方法如圆二色柱、荧光发散、紫外色谱跟踪酶反应进程。因此，很多科学家以反胶束体系来模拟生物膜酶的作用机理及构象变化，导致反胶束体系中酶系统的应用越来越广。 已报道有50多种酶的反胶束体系中具催化活性。反胶束体系中核心水团分为自由水和结合水。 W0较小时，核心水团主要是结合水；随W0增大， 自由水逐渐增加。核心环境逐渐接近水溶液。 酶分子与表面活性剂间作用取决于酶分子与反胶束性质，酶活性主要取决于核心水团大小，表面活性剂性质，反胶束浓度。 Karpe 等用AOT/异辛烷体系研究了α-凝乳蛋白酶的超活性，认为酶超活性是由于：①“水池”中底物浓度高于水相中底物浓度；②带负电的底物与带负电的表面活性剂表面产生斥力作用于酶，使酶活性增大。 辅酶再生：氧化还原酶催化反应中，辅酶再生是决定反应过程经济性的关键因素。PileniM等研究反胶束体系中辅酶NADH的再生。氢的氧化与脂酰氨酶催化NAD+还原结合，