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海洋药化设计实验 * ▲ ？ 虾青素的提取及其理化性质的研究 青色 红色 虾属于甲壳类动物,它们的颜色主要取决于甲壳下面真皮层中散布着的色素细胞。在这些色素细胞中,以含有虾青素的细胞为多。虾青素与不同种类的蛋白质相结合,变为蓝紫或青绿。 当遇到加热时,蛋白质被破坏、变性,与虾青素分离,而且其他大部分的色素遇到高温也都分解掉了,只有虾青素不怕热,不会被破坏,因此颜色即变为原来的橙红色,也就是虾蟹煮熟后的颜色。（即为虾红素） 1、学习虾青素的提取、分离纯化及鉴定的原理和方法。 （一）实验目的： 2、掌握虾青素的理化性质及其药用价值。 虾青素(Astaxanthin)又称虾红素，学名3，3′-二羟基-4，4′-二酮基-β，β′-胡萝卜素, 分子式 相对分子质量为596.86 , 是一种类胡萝卜素。在自然界中，广泛存在于虾、蟹、鱼、某些藻类及真菌中（在一些鸟类中也发现了虾青素的存在）。 （二）实验原理： 图1 虾青素化学结构式 目前，天然虾青素的来源一般有3种：水产品加工工业的废弃物、红发夫酵母（Phaffia rhodozyma）和微藻（雨生红球藻）。 四萜 目前用于水产品加工工业废弃物提取回收虾青素的方法主要有4 种:碱提法、油溶法、有机溶剂法以及超临界流体萃取法。 虾青素属于萜类化合物，极性不强，具有疏水亲脂性，在室温下易溶于二氯甲烷、氯仿、二甲亚砜和丙酮等有机溶剂。虾青素在有机溶剂中的溶解度越大，越有利于从原料中提取虾青素。通常提取后可将溶剂蒸发, 从而将虾青素浓缩, 得到浓度较大的虾青素油, 同时溶剂也可回收循环利用。 虾青素在酵母、细菌、植物等中一般以游离的虾青素存在，而在海产品、藻类等主要以虾青素酯形式存在。虽然以虾青素酯形式存在比较稳定，但虾青素酯与油脂性质较相近，组成复杂，使得纯化困难，测定分析不便。皂化水解后，使虾青素酯变为游离虾青素，分离容易，定量简单。因此，虾青素粗品须进行皂化水解。 1、原料：新鲜虾壳 2、试剂：浓盐酸、氢氧化钠、95%乙醇、氯仿、氢氧化钾、100～200目柱层析硅胶、正己烷、丙酮、高锰酸钾、 溶液、黄曲霉素 、β-胡萝卜素、番茄红素、去离子水、3-甲基胆蒽、4-亚硝基喹啉-1-氧化物、N-丁基-N（4-羟丁基）亚硝胺、维生素A 3、器材：烘箱、水浴锅、高效液相分析仪(岛津 LC-10A)、薄层层析硅胶板、磁力搅拌器、旋转蒸发仪、2.5×60mm沙芯层析柱、注射器 4、小鼠：正常雌雄小鼠、F344雄性小鼠、ICR雄性小鼠 （三）实验材料： 预处理过的虾壳中加入60ml95%的乙醇，75℃水浴振荡0.5h（浸提），抽滤得滤液。滤液水浴加热蒸馏回收大部分乙醇，得浓缩液。 将萃取得到的浓缩液进行冷冻干燥。将其溶于氯仿中，加入质量浓度为40.3g/L的 混合液，在磁力搅拌下进行皂化反应。皂化温度为16.0℃左右，反应37min后停止搅拌。加适量蒸馏水至反应混合液迅速分相。上层水相出现大量白色悬浮物。当有色物质完全转入下层氯仿相时，停止皂化反应，于冰箱冷藏室中静置3 h，直至有色的氯仿相完全澄清。分液，收集下层有色的氯仿相。于40℃，真空浓缩氯仿相，得总类胡萝卜素油粗品。 （四）实验步骤： 预处理 洗 烘 碎 酸 有机溶剂法提取虾青素粗品 虾青素酯的皂化 硅胶柱层析纯化虾青素粗品 虾青素理化性质的鉴定 装柱 样品配置 吸附 洗脱 先用正己烷冲洗至流出液无色，然后依次用正己烷-丙酮（4:1，V/V）、正己烷-丙酮（7:3，V/V）、正己烷-丙酮（1:1，V/V）洗脱。 （1）虾青素的多烯性质: a、抗氧化性质： 取少量粗提液的乙醇稀溶液, 逐滴加入高锰酸钾溶液, 高锰酸钾褪色, 色素红色褪去, 至无色时所需高锰酸钾的量较多。说明虾青素抗氧化活性很强。 b、加成性质: 取少量粗提液的乙醇稀溶液, 加入 溶液, 褪色至无色, 所需的量较多。说明虾青素中不饱和键含量多。 a、对黄曲霉素 引发肝致癌作用的影响： （2）虾青素的抗癌变作用： 随机选取60只健康小鼠，分成A、B、C、D、E、F六组。分别给六组鼠喂饲正常饲料、虾青素、β-胡萝卜素、番茄红素(300mg/kg 每餐) 、额外添加维生素A和腹腔注射3-甲基胆蒽(6 ×20mg/kg 体重)。同时一起腹腔注射 (6 ×20mg/kg 体重)。20周后观察六组小鼠的致癌率。发现虾青素、β-胡萝卜素及3-甲基胆蒽在降低肝癌病灶的数目和大小方面效果显著, 而番茄红素和过量维生素A 无效； b、对口腔癌作用的影响： 随机选取20只雄性F344小鼠，分成A、B两组。分别给两组小鼠饲喂正常饲