分子生物学实验设计报告-四川大学.docVIP

分子生物学实验设计报告 绿色荧光蛋白的克隆表达 实验名称 绿色荧光蛋白的克隆表达 实验所属学科 分子生物学实验 实验开展 支撑平台 四川大学江安校区生物实验室 项目组成员基本信息 序号 1 2 姓名/性别 易尧 王远璋 学号 2013141241034 2013141241019 专业年级 2013级 2013级 所在学院 生命科学学院 生命科学学院 引言 荧光蛋白是海洋生物体内的一类发光蛋白，分为绿色荧光蛋白、蓝色荧光蛋白、黄色荧光蛋白和红色荧光蛋白。 绿色荧光蛋白是由日本学者下村修于1962年从多管水母中发现并分离得到的一种发光蛋白。它是由238个氨基酸构成的“β-桶”型三维立体结构，其中65至67位氨基酸（丝氨酸-酪氨酸-甘氨酸）形成发光团，为主要的发光位置。 通过生物化学的方法将基因做小小的改变，就可以改变GFP中的氨基酸，得到变异GFP。目前应用较多的GFP的突变体-增强型绿色荧光蛋白（简称EGFP） 传统的PCR产物克隆方法主要有两种：一种是PCR引物设计时引入载体上的酶切位点，PCR产物经双酶切后定向克隆到目的载体上；另一种是TA载体连接。这两种方法费时费力，过程繁冗。 而本实验采用的无缝克隆和组装技术是一种新的、快速、简洁的克隆方法，旨在克服上述缺陷，它可以在质粒的任何位点进行一个或多个目标DNA的片断的插入，而