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结直肠癌中PTEN蛋白的表达 【摘要】 目的 探讨结直肠癌中PTEN蛋白的表达及其与侵袭和转移的关系。方法 应用免疫组化SP法检测67例结直肠癌中PTEN、Ecad、MMP2的表达情况，5例正常大肠黏膜作对照。结果 PTEN蛋白表达定位于细胞质。与正常大肠黏膜相比，癌组织中PTEN表达明显降低，并随分化程度降低呈递减趋势；淋巴结转移组明显低于无淋巴结转移组；与浸润深度呈负相关。结直肠癌中PTEN表达与Ecad呈正相关，与MMP2呈负相关；淋巴结转移组 PTEN、Ecad低表达且MMP2高表达的人数明显高于无淋巴结转移组。结论 PTEN、Ecad低表达，MMP2高表达在结直肠癌的侵袭和转移过程中可能起协同作用，联合检测可为结直肠癌生物学行为判定和进一步的研究和治疗提供有效病理学依据。 【关键词】 结直肠癌 PTEN Ecad MMP2 免疫组化 　　0 引言 　　PTEN是迄今发现的第一个具有双重特异性磷酸酶活性的抑癌基因，在参与细胞周期调控、抑制细胞迁移、扩散和转移等方面具有重要作用[1]，但尚需深入研究。本研究采用免疫组化SP法检测结直肠癌中PTEN的表达情况，并分析其表达与生物学行为以及与Ecad和MMP2表达的关系，为结直肠癌的进一步研究和治疗提供病理学依据。 　　1 材料和方法 　　1.1 病例 收集邢台市人民医院2000年11月～2002年10月期间手术切除经病理证实的结直肠癌存档蜡块67例。按照2000年WHO结直肠肿瘤组织学分级标准分类，高、中、低分化腺癌分别为21、15和31例。有淋巴结转移的36例，无淋巴结转移的31例。另选5例正常大肠黏膜作对照。标本经10%中性福尔马林液固定，常规取材、脱水，石蜡包埋，4μm厚连续切片，分别做HE及免疫组化染色。 　　1.2 试剂 鼠抗人PTEN、Ecad、MMP2单克隆抗体（均为即用型）和SP试剂盒及DAB显色剂均购自福州迈新生物技术开发公司。 　　1.3 免疫组化染色方法 采用SP法。 切片常规脱蜡水化，枸橼酸盐缓冲液微波抗原修复（MMP2除外）,分别滴加一抗，4℃湿盒过夜，DAB显色，苏木素复染。用PBS代替一抗作阴性对照。 　　1.4 结果判定标准 PTEN、MMP2表达定位于胞质，Ecad表达定位于细胞膜，阳性信号呈黄～棕褐色颗粒。每例均随机观察10个高倍视野，参照有关研究[1，2]，用半定量积分法判断结果。为确保实验结果评估的准确性，所有病例均经2名有经验的病理科医生进行光镜观察共同确诊。 　　1.5 统计学分析 应用SPSS10.0统计软件对实验结果进行χ2检验、KruskalWallis秩和检验、Spearman等级相关分析。 　　2 结果 　　2.1 PTEN在正常大肠黏膜及结直肠癌组织中的表达 5例正常大肠黏膜组织中PTEN蛋白表达均为阳性,定位于上皮细胞胞质内，其中，强阳性占80%。67例癌组织中，PTEN阳性表达占83.5%，其中强阳性占47.7%，部分病例表达降低或缺失。癌组织中PTEN蛋白的阳性表达低于正常大肠黏膜，见图1～3。 　　2.2 结直肠癌中PTEN表达与临床病理特征的关系 PTEN在高、中、低分化腺癌中的表达呈逐步降低趋势（χ2=23.339，Plt;0.01）；在T3～T4组表达明显低于T1～T2组（χ2=4.644，Plt;0.05）；在淋巴结转移组的表达明显低于无淋巴结转移组（χ2=14.18，Plt;0.01）。PTEN蛋白表达与性别、年龄和病变部位间，均未发现有显著相关性，见表1。 　　表1 67例结直肠癌中PTEN表达与临床病理特征的关系（略） 　　*：侵犯肌层以内；**：侵犯肌层以外 　　2.3 结直肠癌中PTEN表达与E cad、MMP2表达的关系 见表2。 　　表2 结直肠癌中 PTEN的表达与Ecad、MMP2表达的关系（略） 　　结直肠癌中PTEN与Ecad表达呈正相关（r=0.65，Plt;0.01），与MMP2表达呈负相关（r=0.279，Plt;0.05）。值得注意的是，在31例无淋巴结转移的病例中，PTEN和Ecad高表达、MMP2低表达者13例，占41.9%，而有淋巴结转移的36个病例中仅2例，占5.6%，两组具有明显差异（Plt;0.01）；有淋巴结转移的36个病例中，PTEN和Ecad低表达、MMP2高表达者17例，占47.2%，在31例无淋巴结转移的病例中仅有2例，占6.5%，两组亦具有明显差异（Plt;0.01）。 　　3 讨论 　　3.1 结直肠癌中PTEN的表达及意义 近几年研究发现，人类许多恶性肿瘤如胶质母细胞瘤、恶性黑色素瘤、子宫内