肾衰3号颗粒剂对阿霉素肾病大鼠氧自由基的影响.docVIP

肾衰3号颗粒剂对阿霉素肾病大鼠氧自由基的影响 作者：孙元莹，郭茂松，迟继铭，张万祥，张琪 【摘要】 目的探讨肾衰3号颗粒剂对氧自由基的影响，推测肾衰3号缓解慢性肾功能不全（CRF）恶化的作用机理。方法将大鼠随机分为5组，正常组、模型组、低剂量实验组、高剂量实验组和洛丁新组。将大鼠尾静脉注射阿霉素7.5 mg/kg体重，造成阿霉素肾病模型。观察血肌酐（Scr）、尿素氮（Ccr）、肌酐清除率、24 h尿蛋白定量（Uprot）、血清超氧化物歧化酶（SOD）、血清丙二醛（MDA）、肾皮质谷胱苷肽过氧化物酶（GSHPX）和肾皮质MDA、尿N乙酰葡萄糖苷酶（UNAG）、尿β2微球蛋白（β2MG）的改变，以及肾小管-间质病理变化。结果高剂量组尿蛋白含量、Scr、Bun明显降低，与模型组相比，差异显著（P＜0.01）；高剂量组肾皮质 GSHPX的活性、血浆 SOD活性明显降低，肾皮质 MDA含量、血清 MDA明显降低，肾小管间质病理变化，高剂量实验组明显减轻，与模型组相比，差异显著（P＜0.05）。结论 肾衰3号颗粒剂有抗脂质过氧化作用，从而间接地保护肾小球功能，延缓 CRF的进展速度。 【关键词】 慢性肾功能不全； 肾衰3号； 氧自由基； 阿霉素肾病 蛋白尿是肾脏病常见表现，越来越多研究证实，尿蛋白可作为一个独立因素参与肾功能损害，程度呈正相关［1～3］，有学者称为蛋白尿学说。正常情况下，只有低分子物质能进入肾小球囊腔，大分子蛋白质由完整的肾小球基底膜屏障将之保留于肾小球毛细血管管腔内。当患有肾小球肾炎时，基底膜屏障破坏或消失，大分子蛋白包括白蛋白和更大分子量的蛋白质便可进入系膜区以及肾小管液中，此时系膜细胞及肾小管上皮细胞，一次又一次地与这些被异常滤出的大分子蛋白接触，并且相互反应，导致肾小球以及肾小管间质的进一步损害，从而加速肾功能恶化。肾衰3号颗粒剂是导师张琪教授经验方［4］，在黑龙江省中医肾病中心被广泛用于治疗蛋白尿，疗效满意。为进一步探讨其作用机理，进行以下实验。 　　1 材料和方法 　　1.1 材料 　　肾衰3号颗粒由人参、黄芪、葛根、何首乌、丹参等中药组成，黑龙江省中医研究院制剂室制备；洛丁新：北京诺华制药有限公司制造；阿霉素（ADR）：汕头经济特区明治医药有限公司制造，批号991101；考马斯亮蓝 G250；原本皓生物试剂有限公司提供。SOD试剂盒、GSHPX试剂盒、MDA试剂盒，由南京建成生物工程所提供；尿 NAG试剂盒，购自福建三强生物有限公司。 　　 　　1.2 方法 　　 　　纯系成年 Wistar大鼠60只，体重(280±20) g，雌雄各半，60日龄，黑龙江中医药大学动物室提供，购入后适应饲养1周，普通饮食，自由饮水，1周后开始实验。随机分为5组，Ⅰ组正常对照组；Ⅱ组模型对照组；Ⅲ组低剂量实验组；Ⅳ组高剂量实验组和Ⅴ组洛丁新对照组。除正常组外，其它各组一次性尾静脉注射0.2％阿霉素溶液，7.5 mg/kg体重，Ⅰ组注射等量生理盐水。第4周确定造模成功后，Ⅲ组Ⅳ组分别灌胃肾衰3号颗粒剂2 mg/kg体重，5 mg/kg体重，1次/d，至第18周；Ⅴ组灌胃洛丁新10 mg/kg体重，1次/d，至第18周；Ⅰ组、Ⅱ组，每日灌等量生理盐水。给药前每周用代谢笼收集一次24 h尿液，记录尿量，查尿蛋白，第18周大鼠禁食12 h称重，无菌摘眼球取血，断头处死，剖取双肾，分3部分，供光镜、电镜和免疫组化实验；鼠血离心；双肾常规石蜡包埋及 HE染色。 　　1.3 观察项目及测定24 h尿蛋白定量、血肌酐、血尿素氮、内生肌酐清除率用常规法测定。肾小管－间质病理变化，普通光镜观察，每张切片随机观察3个视野，采用半定量分级。（1）肾小管病变：O级 肾小管上皮细胞无明显变化；Ⅰ级 肾小管上皮细胞萎缩病变较轻，呈灶状分布；Ⅱ级 肾小管上皮细胞坏死严重，成片分布；（2）间质炎症：O级 肾间质无或极少见炎性细胞侵润；Ⅰ级肾间质少量散在炎性细胞侵润；Ⅱ级肾间质大量弥散或集聚成灶的炎性细胞侵润；（3）肾间质纤维化：0级无纤维组织增生；Ⅰ级纤维组织呈小灶性；少量分布。Ⅱ级 纤维组织呈多灶状或网连成片。 　　1.4 统计学处理计量资料用t检验,样本均数用±s表示,等级资料用 Ridit分析。 　　2 结果 　　2.1 各组24 h尿蛋白含量变化结果见表1。表1 各组24 h尿蛋白含量比较（略） 　　2.2 肾小管间质病理变化结果见表2。表2 肾小管间质病理变化（略） 　　各组与Ⅱ组比较 P均＜0.05；各用药组肾小管间质病理变化比Ⅱ组明显减轻，Ⅲ组更加明显。 　　2.3 肾功能变化结果见表3。表3 肾功能变化 （略） 　　2.