自来水中细菌总量的测定.docVIP

微生物学实验论文 —自来水中细菌总数的测定 自来水中细菌总数的测定 摘要： 水对于人类扮演者不可或缺的角色，同样水质的好坏对人们生活起着至关重要的作用，而判断水质的标准，微生物在水中的数量、种类是必不可少的。良好的饮用水细菌总数因100CFU/Ml,而500CFU/mL则不适宜饮用，我国饮用水卫生标准（GB5749—85）规定每毫升水样细菌总数37℃培养24h不得大于100个，每升水中总大肠杆菌群数小于3个。本实验采用普通牛肉膏蛋白胨培养基[1]对水中细菌进行培养，通过平板菌落计数技术【2】从而来测定自来水是否符合饮用水的微生物方面的卫生标准。 关键词： 自来水 平板菌落计数技术 牛肉膏蛋白胨培养基 引言： 微生物学指标是评价饮用水生物性污染的重要指标，是水质在流行病学上安全的保证。各种天然水中常含一定数量的微生物。水中微生物的主要来源是：水中的水生性微生物（如光合藻类）、来自土壤径流、降雨的外来菌群和来自下水道的污染物和人畜的排泄物等。自来水指通过水处理厂净化、消毒后生产出来的符合国家饮用水标准的供人们生活、生产使用的水。我国饮水卫生标准（GB5749—85）规定每毫升水样细菌总数37度培养24个小时不得大于100个，每升水中总大肠杆菌群数小于3个。微生物学指标是评价水中生物性污染的重要指标，是水质在流行病学上安全的保证。近年来随着环境污染加重我国水质不断下降，给居民饮水安全带来隐患。因此，我们想通过测定自来水中的细菌总数，了解水质情况，呼吁人们保护水资源。 测定水样是否符合饮用水的微生物方面的卫生标准，通常包括下列两个项目：细菌总数测定和总大肠杆菌群的测定。本实验只包括一群能在营养琼脂上发育的嗜中温的需氧的细菌菌落总数，通过此实验我们能够计算出水中的细菌总数，从而判断自来水是否符合国家标准，是否受到污染。[3] 1. 材料与方法 1.1 材料、试剂与仪器 (1) 实验材料 自来水 (2) 实验试剂 牛肉膏 蛋白胨 NaCl 1mol/LNaOH 1mol/LHCl 蒸馏水 (3) 实验仪器 高压蒸气灭菌锅 培养皿 三角烧瓶 天平 牛角匙 pH试纸（pH5.5-9.0） 吸量管 麻绳 牛皮纸 量筒 玻璃棒 电炉 温度计 1.2 实验方法 1.2.1灭菌 （1）首先将高压蒸气灭菌锅的内锅层取出,再向外锅内加入适量的水,使水面与三角搁架相平为宜。 （2）放回内层锅,并加入用报纸包好的培养皿、三角烧瓶、。 （3）加盖，并将盖上的排气软管插入内层锅的排气槽内。再以两两对称的方式同时旋紧相对的两个螺旋，使螺旋松紧一致，勿使漏气。 （4）用电炉加热，并同时打开排气阀，使水沸腾以排除锅内的冷气。待冷空气完全排尽后，关上排气阀，让锅内的温度随蒸气压力增加而逐渐上升。当锅内压力上升到所需压力时，控制热源，维持压力至所需时间。本实验用0.1MPa,121℃,20min灭菌。 （5）灭菌时间到后，切断电源，让灭菌锅内温度自然下降，当压力表的压力降至“0”时打开排气阀，旋松螺旋，打开盖子，取出灭菌物品。 1.2.2水样的采取 对自来水龙头用火焰烧灼3min灭菌，放开水龙头使水流5min后，用已灭菌的三角烧瓶接取水样，以待分析。 1.2.3制备培养基 （1）称量 按4.2g/100ml营养琼脂粉称量，放在称量纸上，称量后直接放入水中，稍微加热。 （2）溶化 在上述烧杯中加入所需的水后不断搅拌使营养琼脂粉溶解。 1.2.4细菌总数测定 灭菌吸管吸取1mL水样，注入其中一套灭菌的培养皿中。对照不加自来水。 取一空的灭菌培养皿，立即倾注溶化了的牛肉膏蛋白胨琼脂培养基15mL，作空白对照。 （3）分别倾注约15mL已溶化并冷却到45℃左右的肉膏蛋白胨琼脂培养基，并立即在桌上作平面旋摇，使自来水和培养基混匀。 （4）待培养基凝固后，倒置于37℃温箱中，培养24h，进行菌落计数。两个平板的平均菌落数即为1mL自来水的细菌总数。 [4] 1.3菌落计数方法 （1）计算相同稀释度的平均菌落数，若其中一个平板有较大片状菌苔生长时，则不应采用，而应以为片状菌苔生长的平板作为该稀释度的平均菌落数。若片状菌苔的大小不到平板的一半，而其余的一半菌落分布又很均匀时，则可将此一半的菌落数乘2以代表全平板的菌落数，然后再计算该稀释度的平均菌落数。 （2）首先选择平均菌落数在30～300之间的，则只有一个稀释度的平均菌落数符合此范围时，则以该平均菌落数乘其稀释倍数即为该水样的菌落总数。 （3）若有两个稀释度的平均菌落数均30～300之间，则按两者菌