微生物学综合实验(09.docVIP

综合性实验 实验一、噬菌体的分离和纯化及效价测定 病毒是一类个体极小的超显微生物,必须借助电子显微镜才能观察到。病毒没有细胞结构，大多数病毒是蛋白质与核酸组成的大分子，每种病毒的核酸或是RNA或是DNA。它们是专性寄生物，不能独立进行代谢活动与繁殖，只能在特异的宿主细胞内进行复制。根据宿主的不同，可将病毒分为动物病毒(包括昆虫病毒)、植物病毒与细菌病毒——噬菌体等。由于病毒是专性寄生物，因此还不能用人工培养基进行培养，对病毒的培养与测定主要依靠实验性感染，例如细菌病毒(噬菌体)需要对特异性细菌进行感染：植物病毒进行实验性植物感染，而动物病毒常用鸡胚培养和组织培养来代替动物的实验性感染：昆虫病毒则用昆虫感染或组织培养。 一、目的固定化一、目的1、 了解微生物细胞固定化的原理及其优缺点。2、 掌握固定化细胞中最基本、最常用的方法。CaCl2溶液，高温灭菌冷却备用。将无菌海藻酸钠溶解液与培养至一定数量的菌悬液按一定比例（1：3-4）混合均匀，选用针头型号不同的注射器，将混合液缓慢的逐滴滴入0.2 mol/l的CaCl2溶液中，边滴边摇动，此时海藻酸钠中的钠离子与CaCl2中的钙离子发生置换，形成海藻酸钠凝胶网状结构，从而使细胞得以固定，静止15—30min后，将会形成海藻酸钙——细胞固定化胶球。 （四） 固定化条件的选择（选择一组） 1．培养体系中胶球大小比较 用不同大小的针头滴成不同大小的菌珠，设2个平行组。 2．接种量的比较 用104，105，106cell/ml级的菌种密度，设2个平行组。 3．培养体系中胶球密度的比较 培养体系中胶球数200，300，400，设2个平行组。 4．海藻酸钠浓度与氯化钙浓度正交试验 将质量分数为1%，2%，3%(g/L)的海藻酸钠溶液分别与质量分数为1%，2%，3%(g/L)的CaCl2做正交试验。 （五）培养 用无菌去离子水清洗固定化胶球3次，移入250ml锥形瓶中，并加入100ml培养液培养。置于适宜温度进行培养发酵，培养期间要时常摇晃。 （六） 测定方法 1．生长率的计算 根据公式 K=（lnNt—lnN0）／T其中N0是开始的细胞数，Nt是经过T时间后的细胞数。T代表一段生长的时间，K为相对生长常数，代表生长效率。 2．细胞数量的测定 方法1、取相培养一定时期的胶球n粒，分别测定其直径并计算胶球体积，加入一定体积的5%的柠檬酸钠溶液溶解胶球并用血球记数板在显微镜下计算细胞数量。 方法2：取培养一定时期的胶球n粒，分别测定其直径并计算胶球体积， 然后加5ml新鲜培养液在研钵中将胶球小心研碎,再用血球记数板在显微镜下计算细胞数量。 (七) 代谢物质含量的测定 1.酿酒酵母发酵液的酒精含量的测定。 2.小球藻叶绿素含量的测定。 3.乳酸杆菌发酵液的乳酸含量的测定。 五、实验报告 不同固定化方法对微生物生长及产物含量的影响 固定化细胞培养中细胞计数方法的研究及比较 六、参考文献 [1] 诸葛健，王正祥。工业微生物实验技术手册(第一版)，北京：中国轻工业出版社,1994 [2] 王建龙。生物固定化技术与水污染技术。北京：科学出版社，2002 [31王鲁燕，倪孟样等。固定化细胞制备头孢氨节的研究。中国药科大学学报。1999，30(463－465) 创新设计性实验 培养条件对海洋微藻生长及物质积累的影响 一、实验目的：锻炼同学们文献查阅、实验设计及解决实际问题的综合能力二、实验：Dunaliella salina） 三、具体步骤：1、查找文献的及其2、查找文献4、菌株5、 学习了解6、