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微生物遗传与育种 天津科技大学 生物工程学院 DNA的复制特点和几种主要复制方式 真核和原核细胞，其DNA分子都是半保留复制 复制起点（DNA复制开始的特定部位）： 原核生物的染色体DNA一般只有一个复制起点(ori) 真核生物染色体上有多个复制起点（酿酒酵母染色体具有400个复制起点，常被称为自主复制序列） 复制子：每一个复制起点及其复制区为一个复制单位，称为复制子。 复制方向： 双向复制（两个复制叉）：大多数染色体DNA是双向对称复制。 单向复制（一个复制叉） 第三节 原核生物的染色体及其复制 主要组成成分：DNA ≥80%，其余为蛋白质和RNA。 存在形式：DNA一般以裸露的核酸分子存在，虽与少量蛋白质结合，不形成染色体结构。 蛋白质的功能：部分与DNA折叠有关，部分参与DNA复制、重组及转录过程。 一、原核生物的染色体数目与大小 大多数为一条以双链、共价闭合、环状存在的一个核酸分子。 有些细菌有多条环状染色体, 如脱氮副球菌。 有些细菌具有线状染色体，如疏螺旋体。 细菌染色体结构是一团具有许多环状超螺旋结构的DNA大分子，中央有一电子稠密的骨架，其周围附着有30~100个具有负超螺旋结构的环。 思考题： 如何证明拟核骨架是由RNA和蛋白质组成的？ 三、细菌染色体的复制 1. 与DNA复制有关的酶和蛋白质 酶：DNA聚合酶、引物酶 蛋白质：DnaA、DnaB、DnaC、DnaG、SSB等 2. 大肠杆菌染色体复制起点oriC的结构 在oriC位点的右侧，含有4个9bp核苷酸重复序列(5’-ATCCACA-3’)（即4个DnaA盒）； 左侧含有3个13bp富含AT的核苷酸重复序列。 3. DNA复制过程 ?型双向等速复制，包括：起始、延伸、终止。 (1)复制起始：是指参与复制的蛋白质识别复制起点，合成引物，在复制起点形成活性的引物-模板复合物，并按碱基配对加上第一个核苷酸。 第一、oriC区双链解开(DnaA) 第二、DNA链解旋(DnaB)和解开单链的保护(SSB) 第三、RNA引物的合成（了解引发体的定义:引物酶与DnaB结合，形成引发体primosome） (2) 延伸过程：在DNA聚合酶的催化下，以4种三磷酸脱氧核苷(dNTP)为原料，进行聚合的过程。 聚合酶Ⅰ：切引物RNA,填充冈崎片段(Okazaki fragment)的缺口。 聚合酶Ⅱ：催化5’→3’ DNA合成反应。主要修复损伤的 DNA分子。 聚合酶Ⅲ：主要复制酶，由10个不同亚基组成。 复制体(replisome)：在DNA合成的生长点上，DNA聚合酶Ⅲ全酶二聚体、引发体和解旋酶等共同构成了一个不对称的二聚体。 回环模型 (p15-16)。 (3)随着后随链模板在聚合酶中穿行，DNA聚合酶便以RNA为引物合成冈崎片段。当合成的冈崎片段到达前一个冈崎片段的5’末端时，后随链模板就脱离DNA聚合酶，回环解开。 (4)与此同时，前移的复制体内引物酶又合成了一段新的引物，重复以上回环方式以合成后随链。如此，DNA就可以合成出两条子链，只是后随链比前导链晚一个冈崎片段。 (3)复制终止：两个复制叉延环状染色体以相反方向移动，并在一个特定的区域相遇而终止复制。 在终止区域内含有多个ter序列，能与终止蛋白结合，使复制叉停止移动。此外，还有Tus蛋白，能识别ter序列，组织复制叉移动。 在大肠杆菌终止区内，多为生长非必需的DNA，包含一些“假基因”(junk DNA)，如原噬菌体等。 利用放射自显影的方法测定出： 细菌复制叉移动速度大约每分钟50,000 bp。细胞分裂时间与DNA复制一周的时间差别很大： 世代时间为20min，而DNA复制一周为40min。 而且实验还证明：复制叉前进的速度是比较恒定的，复制速度取决于复制起始频率。 细胞如何调节复制和分裂之间的差别呢？ 在营养丰富的培养基中，DNA复制总是在第一个周期还未完成时，就开始第二个周期复制，以保证分裂时每个子细胞都有一个完整的染色体。因此，一个染色体可以不只2个生长点。对数生长期的细胞内可能有2~4个拟核，停止生长的每个细胞内有1个拟核。 环状细菌染色体的分裂 第四节 真核生物染色体及其复制 典型的真核染色体结构: * 第二讲 线状DNA 环状双链DNA 复制方式 θ 型 滚环型 D 型 双向单点 双向多点 E.coli φX174, F因子 线粒体DNA 真核生物染色体 DNA复制的几种主要方式 二、细菌染色体的结构 链环状的染色体在细胞中以紧密缠绕成的较致密的不规则小体形式存在于细胞中，该小体即称为拟核(nucleoid) 。 其中心为多种DNA结合蛋白（还有少量RNA分子），与DNA双螺旋分子的许多位点结合，形成大约100个小区（domain），每个小区的DNA都为负超螺旋