生命分析化学.pptxVIP

生命分析化学常应用于生命科学中的分析化学方法：电化学分析，质谱分析，色谱分析，光化学分析。电化学分析电化学传感器：自1967年Updike研制出世界上第一代生物传感器-葡萄糖酶传感器以来，已发展到第三代生物传感器。制备的电极有糖、氨基酸、蛋白质、dna、抗原、抗体、激素、受体、细胞器、酶免疫等生物传感器。这些传感器与流动注射分析、微机处理技术、微电极技术等相结合，在生命科学中发挥重要作用电化学分析 酶传感器是利用酶在生物化学反应中特殊的催化作用,使糖类、尿素、有机酸、ATP等生物分子在常温下分解、氧化,从而检测反应过程中消耗或产生的化学物质,以测定生物分子。例如,将胆固醇脂酶固定在牛血清蛋白上制成光纤胆固醇传感器,可测定血清中胆固醇含量。酶传感器主要有GPT (谷氨酸丙酮酸转氨酶) 传感器、胆固醇传感器、胆甾醇传感器、腺苷传感器、尿素传感器等。 微生物传感器是将微生物膜修饰在氧电极或其它电极上组成的传感器,可用于测定各种微生物。如BOD(生物耗氧量) 传感器,变异原传感器。免疫传感器是利用抗原与抗体间的专属性反应制备出的高选择性、高灵敏度的传感器。如HCG(绒毛膜促性腺激素) 传感器可方便地用于怀孕与否的检查,AFP (α—甲胎蛋白酶) 传感器可用于肝癌诊断。电化学分析微电极~化学修饰电极 微电极用作电化学探针,可检测动物脑神经传递物质的扩散过程。在电化学免疫分析中,用20uL 样品可测定10 - 18mol. L - 1免疫球蛋白- G,采用微电极可将样品量降低至nL 级,可测量10 - 19 —10 - 20mol. L - 1的物质。用微电极还可测定单个细胞中的神经递质 化学修饰电极的方法可将生物大分子牢固地固定在单晶基体上,再采用STM(扫描隧道显微镜) 和AFM(原子力显微镜) 技术,可以在生命的天然或准天然条件下对生物样品的构型进行不同视野的观察,分别获得接近分子水平、超分子水平、亚分子水平及原子水平的图像,对研究生物大分子的形貌及变性、失活过程,对揭示生命过程的本质具有重要意义。质谱分析反应质谱法(RMS) RMS 可分析糖及糖苷结构。在质谱仪的离子源中引入立体选择反应试剂—芳基硼酸,使之与糖发生分子—离子反应,产生特征笼状离子,由其丰度可区分糖的立体异构体。在离子源中同时加入NaCl 、LiCl ,由产生的加合离子峰可确定糖苷的准分子离子及分子量,若将糖苷的分子离子引入活化碰撞室,运用MS/ MS 技术可实现一次进样获得苷元结构鉴定、糖基序列和精确的分子量信息。运用反应质谱法,以α—苯基丁酸酐为立体选择反应试剂可测定生物碱、氨基酸等的绝对构型,以Me3SiNEt2 为反应试剂可测定甾体激素的构象,以二卤卡宾可测定烯的构型,以(MeO) 3B 为反应试剂可区别、鉴定邻二醇的苏式和赤式。快原子轰击质谱(FABMS) 1981 年Barber 创立的FABMS 是分析低分子量肽的有效方法。Barber 研究了蜂毒素、胰高血糖素、胰岛素B 链、牛胰岛素、人胰岛素原等多肽和蛋白质。若将蛋白质酶解后进行质谱分析,测定各组份的分子量,再根据酶解选择性确定蛋白质序列结构,最终可得“肽图”。聚糖、糖苷和糖蛋白的分析比肽的分析难度更大,不仅要求分子量测定和糖基序列分析,而且还要进行苷键联接点测定和立体化学分析。用FABMS 可分析聚糖的连接方式,用FABMS/ MS 可测定糖苷的结构,对于糖蛋白的分析,一般是先将蛋白和糖基分开,再进行FABMS 分析。目前,利用反应质谱法已进行了糖的立体化学分析。电子喷雾质谱法( ESMS) ESMS 利用形成的多电荷离子可准确地、高灵敏地确定高分子量的蛋白质,所测蛋白的分子量可高达133000dalton (牛血清蛋白二聚体) 。另外,用ESMS 还可鉴定蛋白质的纯度。等离子体解吸质谱(PIMS） PIMS 具有可测量质量范围宽和灵敏度高的优点,适用于多肽和蛋白的分子量测定,也可研究蛋白翻译后的修饰状况以及在体酶促反应等,还可提供有关合成多肽中的氨基酸缺失,去保护程序等信息。核苷和核苷酸的分析也可采用等离子体解吸质谱法。离子喷雾质谱法( ISMS) ISMS 可方便地用来测定一种可阻止器官移植后组织排斥的环状肽(cyclosporine) 的序列,这是用普通仪器很难做到的。ISMS 法还可分析质量非常接近的类蛋白,测定马体中肌红蛋白(分子量16950. 5dalton) 时,分子量可准确到0. 2dalton ,而且由于灵敏度高,只需3 ×10 - 15mol 肌红蛋白样品。有关酶和抑制因子体系的共价键、立体专一性以及化学计量学的确定,用传统方法需要进行同位素标记合成,费时费力,用ISMS 可在几分钟内解决问题。类牛胰岛素一I 具有刺激癌细胞生长的功效, ISMS 法为识别癌细胞调节中心的肽段