第二章微生物的保护和保藏pptConvertor.docVIP

第二章 微生物资源的保护和保藏 1 一、微生物资源保护 微生物资源与人类生态系统 微生物资源保护的重要性 微生物资源保护策略 微生物多样性保护策略具有广泛的领域和规模，然而这一过程通常分成三个基本部分：抢救微生物多样性；研究微生物多样性；持续、合理地利用微生物多样性。 2 云南大学云南省生物资源保护与利用重点实验室 已建成西南微生物种质资源库、基因与蛋白、微生物发酵和次生代谢产物研究平台。现拥有2栋独立科研大楼，总面积达5800平方米以上。设备总值达3000多万元。 实验室的主要研究方向及研究领域为： （1）特色生物的物种与遗传多样性：特色生物的基因多样性，物种演化和区系演变的规律及其与地理环境变化的关系；动物、植物与微生物协同进化的关系与规律；特色生物资源保护的策略。 （2）资源微生物利用的基础理论与关键技术：具重要应用前景的微生物资源评估和生物学基础研究；微生物基因工程菌构建及产业化开发；植物寄生线虫微生物农药研究；具活性的微生物次生代谢产物及先导化合物研究。 （3）生物多样性的生态功能与修复：污染及极端环境中植物、微生物的抗性、适应及多样性变化机制；山区土地植被变化与生物多样性维持 ；关键区域受损生态系统的退化机制与恢复。 3 微生物资源与人类生态系统 生态系统 在一定时间和空间内，生物与其生存环境以及生物与生物之间相互作用，彼此通过物质循环、能量流动和信息交换，形成的一个不可分割的自然整体。 4 微生物与人类生态系统的相互影响 微生物对人类生态系统的影响 自然生态系统的主要分解者 自然界中元素的平衡者 土壤肥力的保持者 人类生态系统对微生物的影响 环境影响自然界微生物的生存 5 微生物资源保护的重要性 维持生态系统平衡 推动生物技术发展---生物酶等 基因资源库 大量微生物资源尚需发掘 6 微生物资源保护策略 天然微生物资源的保护 保护微生物的栖息生存环境 生产菌种和专利菌种的保护 知识产权保护 加强微生物资源保护法律法规建设和宣传工作 把微生物资源作为国家的战略资源来认识，开发与保护并重 7 目的：确保微生物生产性能稳定、不染菌、不死亡等。 原理：“休眠” 二、微生物物种资源的保藏 8 （一）菌种保藏的原理 菌种保藏主要是根据微生物生理生化特点，人工制造环境条件，使微生物代谢处于不活泼，生长繁殖受抑制的休眠状态，即采取低温、干燥、缺氧三个条件，使菌种暂时处于休眠状态。 挑选典型菌种的优良纯种 一般采用微生物的休眠体（如孢子、芽孢等） 创造适于微生物长时期休眠的环境条件（如干燥、低温、缺氧、避光、缺乏营养以及添加保护剂或酸碱中和剂等） 9 几个概念 1. 衰退（degeneration）：在微生物的生长过程中，由于变异的存在，使原有的优良性状发生负变，即菌种的衰退。 10 2. 复壮(rejuvenation) 狭义的复壮 是指在菌种已发生衰退的情况下，通过纯种分离和生产性能测定等方法，从衰退的群体中找出未衰退的个体，以达到恢复该菌原有典型性状的措施； 广义的复壮 是指在菌种的生产性能未衰退前就有意识的经常进行纯种的分离和生产性能测定工作，以期菌种的生产性能逐步提高。实际上是利用自发突变（正变）不断地从生产中选种 11 菌种的复壮措施 纯种分离 纯菌落的分离方法（平板表面涂布法，平板划线分离法，琼脂培养基浇注法）-菌落纯 纯细胞的分离方法（利用培养皿或凹玻片等作分离小室进行单细胞分离；显微操纵器进行单细胞分离；不长孢子的丝状真菌，则可用无菌小刀切取菌落边缘疏稀的菌丝尖端进行分离移植，也可用无菌毛细管插入菌丝尖端，菌丝尖端切割法进行单细胞分离）-菌株纯 12 通过宿主体内生长进行复壮（如Bacillus thuringiensis的复壮） 对于寄生性微生物的退化菌株，可通过接种至相应的昆虫或动、植物宿主体内的措施来提高它们的致病性。例如，经过长期人工培养的Bacillusthuringiensis，会发生毒力减退和杀虫效率降低等现象。这时，可将已衰退的菌株去感染菜青虫等的幼虫（相当于一种活的选择性培养基），然后可从病死的虫体内重新分离出典型的产毒菌株。如此反复进行多次，就可提高菌株的杀虫效率。 淘汰已衰退的个体（采用比较激烈的理化条件进行处理，以杀死生命力较差的已衰退个体） 有人曾对Streptomycesmicroflavus“5406”抗生菌的分生孢子，采用－10～－30℃的低温处理5～7天，使其死亡率达到80％。结果发现，在抗低温的存活个体中，留下了未退化的健壮个体，从而达到了复壮的目的。 13 防止菌种衰退的方法 1 控制传代的次数（一般在DNA