DDRT-PCR筛选辐射致癌差异表达基因的.docVIP

第二军医大学 硕士学位论文 DDRT-PCR筛选辐射致癌差异表达基因的研究 姓名：孙顶 申请学位级别：硕士 专业：放射医学 指导教师：韩玲  坝上论文 中文摘要 ????筛选辐射致癌差异表达基因的研究 ?形恼R? 有片面性。因为不可能通过数个基因的情况而了解细胞恶性转化的整 个过程，而且辐射致癌或者致细胞恶性转化本身就存在相当的复杂性 与异质性。因此阐明辐射致癌机理需要从整体的角度，全面识别正常 细胞与相应恶传细胞之间的差异表达基因，寻找未知的参与细胞恶性 转化过程的基因。随着分子遗传学技术的快速发展，尤其是??差 异显示技术创建以来，规模性识别不同功能状态细胞之间的差异表达 基因在技术上成为可能。 ??差异显示技术是九十年代发展起来的一种新的细胞基因表达 差异分析方法，又称差异显示反转录????—??，其基本原理 ?乃婊??锝?蟹醋B糚?，扩 ?说拿6ㄒ?锖? ?┒耍?捎?’端的随机引物较短，能与多种??配  中文摘要 序胶电泳和同位素自显影，可显示出一定的带谱。通过变化引物组合， ??种??都可能被显示出来。比较不同 功能状态细胞的??指纹，可鉴定出差异表达的基因。此法的优点 鉴定某一过程??绶?渲掳┕??所特异的基因差异表达及发现肿 瘤相关新基因。该技术的创建为研究肿瘤发生发展中的基因开关及表 达程序提供了强有力的工具，推动肿瘤分子机制的研究。 是对照显影胶片对凝胶进行切割，这种非直接切割很容易造成误切， 以至影响后续的一系列试验。由于同位素对人体还存在一定的伤害 性，同位素试验需要有专门的实验室，各种废弃物的处理也很麻烦。 最大的优点就是所有条带能够直接从凝胶上读出，这给目的条带的切 割带来了很大的便利，已经成为一种成熟的实验技术。但是从查阅的  中文摘要 硕士论文 产物进行检测，??等报道利用地高辛代替同位素，但是上述方法 均需要特殊的检测仪器或者灵敏度不够高，阻碍了这一技术的发展和 的选择和染色进行了调整，并与文献报道的方法进行比对，希望建立 一个稳定理想的实验方法。 ? ? 位移大，通过延缓测量时问，可以最大限度的排除非特异本底荧光的 干扰，使测量灵敏度可与放射性核素标记方法相媲美，该方法集快速、 简便、高灵敏度、安全、稳定于一体，在核酸的定量性分析中具有广 泛的应用前景。目前国外已有??标记的核酸分析试剂盒供应，即 凝胶点泳进行定量分析，国内本实验室在自然基金的资助下，将其应 荧光技术用于凝胶电泳中生物大分子的检测国内尚无报道，国外在这 方面的介绍也不是很多，而且国外使用时间分辨荧光检测技术对凝胶 电泳中生物大分子的定性和定量研究方法较为繁琐且需要特殊的仪 器作为辅助。 技术进行修改，建立一种稳定理想的差异表达方法，以辐射致癌裸鼠  颁上论文 替代常规的测序胶电泳，并使用银染技术替代了常用的放射自显影技 术，其分辨率，可操作性及安全性均优于文献报道的试验方法。 未照射动物的的胸腺、骨髓细胞的??进行了比较，运用?对引物 成功的筛选出了差异表达的基因?条，并已重扩增出来。 腺素蛋白条带，并与考马斯亮蓝的染色结果进行了比较，敏感性、特 异性及分辨率均较令人满意，且操作简单，无放射性污染。 结论： 之处。  中文摘要 硕十论文 及简单的操作程序提示应用该方法替代银染或者放射自显影技术检 总之，使用差异显示技术来检测某一个过程中差异表达的基因或 者用来筛选新的基因切实可行，使用非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳替代 测序胶电泳，银染技术替代放射自显影来检测凝胶电泳中的条带无论 从分辨率、操作的简繁程度以及安全性均具有很大的优势，在筛选出 来的基因中有望寻找到几条辐射相关的的新基因。此外，时间分辨荧 光技术用于检测凝胶电泳中生物大分子切实可行，且其效果优于放射 自显影技术，用其替代放射自显影或者银染成为可能。 关键词：辐射致癌；????；时间分辨荧光  英文摘要 碗?论文 ? ?????? ????? ????? ???? ???? ?? ? ???? ?? ???? ????? ? ??? ??? ???? ?? ? ????? ???瑀???? ? ?? ????? ? ? ???? ????? ? ?????????，?????? ???? ???? ??????，?? ? ????? ? ????瓵?? ?? ??? ???? ??? ???，????，???? ??????． ??? ?? ???? ? ? ?? ?? ? ????? ?????．?? ?? ????? ?? ??????? ????? ?? ? ??? ??????? ? ? ? ????? ???? ????? ? ??? ??? ??????? ?琁?猺?、? ?