分子生物学常用技术及其应用要点.ppt

尽管PCR扩增DNA非常有效，但目的DNA序列的指数扩增并不是一个无限制的过程。 在正常的反应条件下，经30次循环之后，酶的催化反应趋于饱和，就会出现平台效应 (Plateau) ，产物的量不再增加。 “平台效应”出现的迟早还取决于酶的性能、模板DNA的拷贝数、dNTP浓度等多种因素。 RT—PCR 以mRNA为原始模板的PCR，亦称逆转录PCR。 逆转录反应在42 ℃进行，随后将反应混合物加热至95 ℃5min，灭活逆转录酶，取2ul反应产物，按DNA为模板的PCR反应步骤，进行扩增反应。 三、PCR在医学中的应用 对人类遗传信息的认识和研究 基因工程药物与疫苗生产 转基因动物和植物制造 基因诊断与基因治疗 镰刀型红细胞贫血 Chehab等设计一对引物把含有突变的DNA片段（共294bp）扩增，扩增产物用限制性内切酶 OxaN I消化，琼脂糖凝胶电泳后染色观察： 正常人有2个片段，191 和 103bp， 镰刀状红细胞贫血的 纯合子，仅有一个片段294bp 杂合子有191、103和294bp 3个片段 综合了分子生物学、微电子学、微加工和计算机等学科知识 本质：在固定的玻片等载体上的微型生物化学分析系