细胞工程花药和花粉培养.pptx

西華师范大学CHINA WEST NORMAL UNIVERSITY细胞工程 CELL ENGINEERING第 7 章 花药和花粉培养 制作：学号：日期：西華师范大学CHINA WEST NORMAL UNIVERSITY第 7 章 花药和花粉培养本章主要内容花粉和花药培养技术花粉和花药培养应用西華师范大学CHINA WEST NORMAL UNIVERSITY掌握花药培养和花粉培养的区别了解花药最佳接种时期掌握花药培养的大致过程掌握花粉发育的途径掌握花粉培养的大致过程了解花粉和花药培养过程中的白化苗问题本章教学目的与要求西華师范大学CHINA WEST NORMAL UNIVERSITY7.1 花药培养1、花药培养（anther culture )：指的是将花粉发育至一定阶段的花药接种在适宜的培养基上，使得其中的花粉发育成单倍体植株的过程。西華师范大学CHINA WEST NORMAL UNIVERSITY2、花药培养简史1964年：GuhaMaheshwari南洋金花花药培养发育成胚；1967年：BourginNitsch花药培养获得烟草植株；1973年：我国首次报道了小麦花药培养获得再生植株；80年代后期到90年代期间，花培技术迅速发展。许多作物小孢子培养已经成功。十字花科、麦类、水稻、玉米等；90年代，一些先前被认为是不易进行小孢子培养的基因型也相续成功Konzak (1999) 西華师范大学CHINA WEST NORMAL UNIVERSITY3、花药培养与单倍体育种花药培养的主要目的，是培育花粉粒的单倍体植株，并使单倍体加倍，作为育种材料的来源。利用杂种花药离体培养获得的再生植株，由不同基因型的配子发育而来，具有丰富的变异类型，选择出有利的变异类型，经过经济性状鉴定后，选出优良者直接用于生产或配制杂交组合，获得优良杂交种子。构建永久性分离群体－双单倍体系（Doubled haploid)，用于基因定位。西華师范大学CHINA WEST NORMAL UNIVERSITY4、花药培养主要环节：选材：选取花粉单核期的花蕾或幼穗（例如：在水稻中，以单核靠边期的花粉对诱导单倍体植株较为适宜，在外部形态上可根据叶枕距为5-15cm，颖片淡黄绿色、雄蕊长度接近颖片长度的1/2这些条件鉴定。）预处理:低温冷藏是最常用的方法表面消毒接种：无菌条件下取出花药接种并培养形成花粉植株：花粉胚或花粉愈伤组织发育到适当阶段后，转入再生培养基中生成花粉植株移栽：炼苗后移入土壤栽西華师范大学CHINA WEST NORMAL UNIVERSITY5、水稻花药培养过程剥去旗叶鞘，取出稻穗旗叶鞘用70％酒精擦洗一遍左手持穗，右手用镊子取花药，放无菌培养皿中10％漂白粉10 min无菌水洗3次培养5天，花药变褐，20天后花药裂开，长出淡黄色的花粉愈伤组织，先长芽，后长根，形成幼苗。用接种环接种到培养基上西華师范大学CHINA WEST NORMAL UNIVERSITY附：水稻花药培养过程接种在平板上的水稻花药部分花药产生愈伤组织愈伤组织分化形成再生植株愈伤组织转接种到再生培养基西華师范大学CHINA WEST NORMAL UNIVERSITY6、影响花粉植株诱导率的因素：供体植株基因型：不同植物甚至不同品种之间对花药培养的反应都有差异。因此选择合适的品种是培养能否成功的关键供体植株的生理状态：如多年生植物中，幼年植株比老年植株的花药诱导频率高花药的发育时期：在诱导花粉进行雄性发育(指小孢子沿孢子体途径发育成花粉植株)过程中，不同物种花粉最适的发育时期不同。对多数植物来说，单核中期或晚期的花粉最容易形成花粉胚或花粉愈伤组织。花药供体植株的生长条件：水稻、小麦、大麦等禾本科植物，主茎穗比分蘖穗花药愈伤组织的诱导率明显地提高。同步化程度高。西華师范大学CHINA WEST NORMAL UNIVERSITY7、培养基在花药培养中的重要作用：我国科学工作者对水稻、小麦的花药培养基做了改进，研制出N6培养基。在N6培养基上，水稻花粉的出愈率大幅度提高。N6培养基的特点是铵离子浓度较低。随后，进一步降低铵盐和硝酸盐浓度，同时附加生物素，研制出C17和W14培养基，它们可以大幅度提高小麦的花药出愈率。常用培养基MS和H培养基：适合双子叶植物花药培养B5培养基：适合豆科和十字花科花药培养N6培养基：适合禾谷类作物的花药培养西華师范大学CHINA WEST NORMAL UNIVERSITY8、激素种类和浓度在花药培养中的重要作用：细胞分裂素可促进胚状体形成 生长素可诱导愈伤组织形成 细胞分裂素与生长素比值高时可诱导愈伤组织分化苗9、蔗糖浓度在花药培养中的重要作用：较高浓度蔗糖可诱导花粉形成愈伤组织较低 浓度蔗糖可使愈伤组织分化成苗西華师范大学CHINA