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人血清白蛋白融合技术研究进展 郑 炜，李 杰 ( 宜昌人福药业有限责任公司，湖北 宜昌 443005) 摘 要: 人血清蛋白是血液中含量最丰富的蛋白，它半衰期长，且具有运输药物的功能，这是其成为理想的药物载体。作为延长药物半衰期的新技术，白蛋白融合技术是近年来发展迅速，应用广泛的蛋白质工程技术，通过共价偶联，非共价偶联、纳米包裹和融合蛋白的方式可实现白蛋白与药物分子的偶联，使药物分子的药代动力学得到明显改善。系统介绍了白蛋白融合技术的主要方式，进展以及发展方向。随着白蛋白和相关受体蛋白作用机制的研究不断深入，基于结构的白蛋白融合技术将进一步提高白蛋白融合技术在长效药物开发中的应用。 关键词:人血清蛋白；基因工程；融合蛋白；半衰期 正文 生物技术产业已经成为全球炙手可热的研究热点，美国NASDAQ的Biotech lndex近十年来增长了一倍。而蛋白质和多肽药物的开发则是生物技术产业的主要研究热点，如凝血因子、抗体、白介素( Interleukin，IL) 、胰岛素( Insulin) 、干扰素( Interferon，IFN) 、促红细胞生长素( EPO) 、粒细胞集落刺激因子( G-CSF) 以及各种疫苗等，这些产品广泛用于医药、食品、保健品、生物材料等众多领域。然而，大多数蛋白和多肽药物的半衰期很短，一是因为蛋白质药物会被体内的蛋白酶降解而快速清除; 二是由于肾小球的过滤作用使分子量小于60kDa的药物在肾脏代谢中也易被清除。在临床治疗时，为维持有效血药浓度需要大剂量频繁用药，而长期的反复注射易引发毒副反应，增加病人的痛苦。 各种延长药物半衰期的方法相继得到发展和应用，通过增加蛋白分子量以减少肾小球的滤过作用，通过微球化使药物得到缓释，通过构建抗蛋白酶的突变体减少蛋白酶对药物的降解，主要技术其中包括: 化学修饰、微囊化/纳米粒、构建蛋白酶耐受突变体、蛋白质融合技术 。化学修饰、微囊化和构建突变体容易使蛋白和多肽药物活性丧失，并且降低组织对药物的有效吸收，还极易产生新的抗原表位，引起机体过敏反应; 不恰当的蛋白融合也容易使药物分子活性受到影响。因此，开发一种既可保持生物活性，又无任何副作用的长效药物技术对提高临床用物的药效十分关键。 人血清白蛋白的融合技术 人血清白蛋白( Human Serum Albumin，HSA) 是人体血液中的主要蛋白，该蛋白由585个氨基酸构成，是人体循环系统内的含量最多的可溶性蛋白，在血液中的浓度为34~54g/L。HSA在调节胶体渗透压、营养和促进伤口愈合等方面起着巨大作用，广泛用于肝硬化腹水、烧伤、休克等的临床治疗，同时还可作为载体蛋白参与药物在体内的运输功能(HSA由肝脏合成，血清半衰期很长，可达19 天HSA能够与gp18、gp30、gp60和FeRn 等受体结合，调节HSA的运输和 分布。 由于HSA具有无免疫原性、人体相容性好、组织分布广、无酶活等特性，使其成为非常理想药物融合载体。各种基于HSA的药物融合技术也得到发展和应用，其主要方式主要包括非共价偶联、化学共价偶联、纳米粒子和融合蛋白等四种形式( 如图1所示) ( 多种针对癌症、肝炎、糖尿病以及心血管疾病的药物都相继被开发成 HSA融合药物，并已进入临床试验阶段( 见表 1) ，有望在近期投入使用。 图1 人血清蛋白融合技术示意图 1.1 非共价偶联技术 HSA具有多个药物和脂肪酸的结合位点，在血液中能够结合和运输各种激素、脂肪酸以及小分子药物，因此小分子药物与HSA的相互结合在药物代谢过程中起着非常重要的作用。因此，通过增强小分子药物与HSA的相互作用可以达到增强药物半衰期的作用。例如，诺和诺德公司的Levemir和Victoza两种药物通过与脂肪酸偶联，增强与HSA的结合，使两种药物的半衰期从几分钟增加到几小时，甚至十几小时; 最新开发的Albutag则是一种能与白蛋白紧密结合的小分子，将抗体与albutag融合可显著增强抗体在体内的半衰期。同样，能够与 HSA紧密结合的蛋白分子也被用于增强药物半衰期，如链球菌G蛋白中的 ABD(Albumin binding Bomains) 结构域，该结构域能够与HSA紧密结合，改造后的ABD与白蛋白的亲和力可达飞摩尔级。药物通过与ABD偶联，也能够显著增强其半衰期，如IFN-2b、Fab、Nanobody 等与ABD融合之后( 见表 1) ，半衰期延长了几十倍，甚至达到40小时以上，显著增强了药物的有效浓度。 表1 人血清白蛋白融合蛋白的研究现状 1.2 共价偶联技术 通过化学偶联的方式也可将药物与HSA偶联，主要通过催化人血清白蛋白的赖氨酸残基( 氨基) 和半胱氨酸残基( 巯基) 与药物的共价结合( 早期研究将氨甲喋呤(Methotrex