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基因工程Gene Engineering 第1章 绪论 Introduction 基因工程的概念 基因工程（Gene manipulation, recombinant DNA technology, Genetic engineering）将外源基因通过体外重组后导入受体细胞内，使这个基因能在受体细胞内进行复制、转录和翻译表达的操作叫做基因工程。 包括：基因的分离、重组、转移、基因在受体细胞中的保持、复制、转录和翻译表达等全过程。 遗传工程的概念有广义和狭义之分 传统遗传操作——杂交技术 现代遗传操作——基因工程 基因工程的理论基础 基于遗传学和分子生物学的发展 1.1 基因工程的发展历史 1.1.1 基因工程的理论基础 DNA作为遗传物质的证据 1 1928年，F. Griffith的转化实验。 1944年，Oswald Avery 报道转化的物质是DNA。 2 1952年，A. Hershey M. Chase的噬菌体标记实验。 RNA是遗传物质的证明 1955年，H. Fraenkel Conrat B. Singer 证明了TMV是RNA病毒，它是一种遗传物质。 1944 O. Avery, C. MacLeod, M. McCarty Reported that they had purified the transforming principal in Griffiths experiment and that it was DNA. 1952 A. Hershey M. Chase Used phages in which the protein was labeled with 35S and the DNA with 32P for the final proof that DNA is the molecule of heredity. 1950年 Erwin Chargaff 提出了Chargaff规则T=A C=G 1953年，Watson Crick 提出了DNA双螺旋结构模型。 DNA的成分：磷酸、戊糖、四种碱基。 Erwin Chargaff rule M. Wilkins R. Franklin 1957年，Meselson-Stahl的半保留复制证明了这一学说的正确。 遗传物质的结构与传递规律（遗传信息流） 1.1.2 基因工程的技术源泉 1956年，Korngberg 从E. coli 中分离纯化了DNA聚合酶I这是能在试管中合成DNA的第一个核酸酶。The Nobel Prize in Physiology or Medicine in 1959 1.1.2 基因工程的技术源泉 限制性内切酶的发现 1.1.2 基因工程的技术源泉 DNA连接酶是1967年 Gellert M (NIH， Maryland) , Olivera B.M.(Stanford school of Medicine, CA) Weiss B.( Harvard Medical School) 三个实验室同时发现的。它是一种封闭DNA链上切口的酶，借助ATP或NAD水解提供的能量催化DNA链的5-P与另一DNA链的3-OH生成磷酸二酯键。 1.1.2 基因工程的技术源泉 1972年，斯坦福大学P. Berg小组完成了首次体外重组实验。在PNAS发表了题为“将新的遗传信息插入SV40病毒DNA的生物化学方法：含有?噬菌体基因和E.coli半乳糖操纵子的环状SV40 DNA”。 2. Boyer-Cohen实验 1.1.2 基因工程的技术源泉 1972 Paul Berg Herb Boyer Produced the first recombinant DNA molecules. They Shared the 1980 Nobel Prize in Chemistry for his fundamental studies of the biochemistry of nucleic acids, with particular regard to recombinant-DNA, 1.1.2 基因工程的技术源泉 基因的概念及其发展 (1)早期的基因概念 是存在于DNA上并承载遗传信息的核苷酸序列；是染色体上呈现行排列的遗传物质的最小单位；是携带遗传信息的结构单位和控制遗传性状的功能单位。 随着分子生物学研究的深入，人们对基因的认识不断提高，发现了“等位基因”，“移动基因（movable gene) -转座子（transponsable element)”，“断裂基因” （Spli