实验细胞器的分离概要.pptVIP

密度梯度离心法：使离心溶液含有密度逐步增加的（密度梯度）极易溶解的惰性物质，例如蔗糖，利用这一密度梯度来维持重力的稳定性和抑制对流。操作时，将细胞匀浆液置于离心管的最上层，随后离心，这样，不同大小、形状、密度的细胞结构，由于它们的沉降系数不同，就会以不同的速率向下移动，分别集中到相应的密度区带而得以分离。 实验注意事项： 1.冰水中匀浆肝组织； 2.过滤匀浆液的纱布事先用预冷蔗糖液浸湿； 3.收集液体要避免吸到脂肪层； 4.标记玻片。 * 一、实验仪器 每组（两人） 匀浆器一个，大小烧杯各一个，5ml和15ml离心管各两支，小漏斗一个，纱布一块（用完后要清洗备用），低速离心机（郑冰蓉老师处借来）和高速离心机11000rpm。 二、实验药品 生理盐水或（蛙的为0.65%），蔗糖溶液（0.25Mol/L蔗糖和3Mol/LCacl2配制成蔗糖缓冲液），健那绿B，吉姆萨 细胞内各种结构的密度、形状、大小各不相同，因此它们在同一离心场内的沉降速率就不相同。而且在进行沉降时各自要求的离心力也不相同。差速离心的方法就是根据这一原理，利用不同的离心速度所产生的离心力，将各种亚细胞组分和颗粒分别分离开。当离心力低，离心时间短时，细胞核即可沉到管底；加大离心力后，又可分离出线粒体：离心力再加大，又能分离出微体和核糖体。 上图为移动区带离心，梯度存在的主要目的是减少样品的扩散，使待