DMEM细胞培养基及其改良品种.docVIP

DMEM细胞培养基及其改良品种 DMEM由Dulbecco改良的Eagle培养基，各成份量加倍，分低糖（1000mg/L）、高糖（4500mg/L）。细胞生长快。附着稍差的肿瘤细胞、克隆培养用高糖效果较好，常用于杂交瘤的骨髓瘤细胞和DNA转染的转化细胞培养。例如CHO细胞表达生产乙肝疫苗、CHO细胞表达EPO。 改良DMEM细胞培养基——DMEM（HED）细胞培养基 DMEM（HED）细胞培养基，培养CHO细胞生产乙肝疫苗，具有较强细胞维持能力，可增加收液次数，有效提高蛋白表达率。 生产和试验研究证明，DMEM（HED）细胞培养基在细胞生长和病毒分泌方面均优于使用DMEM细胞培养基。 a) 使用DMEM（HED）细胞培养基细胞贴壁和长满单层时间明显快于传统DMEM细胞培养基，维持2个月细胞未出现脱落现象。 使用DMEM（HED）细胞培养基，在接种后第2天， 80％细胞已伸展并开始分裂增殖，第3天已长成较密单层，细胞贴壁均匀，形态清晰，呈多边形和梭形，细胞间略有空隙，细胞数为7.5 x 106个／ml。在此后转瓶培养的60 d内细胞数保持稳定，无明显增加和减少，无脱落，无明显形态变化，培养液中HBsAg滴度稳定在1：128～1：512之间。 而使用传统DMEM细胞培养基，只有30％和40％的细胞伸展，至第4天才长成较密单层，小方瓶与双层转瓶结果相同。至30 d 时已长成较厚的复层，并开始大片脱落，细胞数明显减少，HBsAg滴度降低，最低降到1：32 。此后细胞开始重新贴壁、增殖，至45 d左右部分细胞长成单层，一部分细胞因脱落，至60 d时仍未能长满转瓶。 优点 ? ? ? DMEM细胞培养基的成分 粉末型（A） 粉末型（H） ? ? ? 粉末型(L) ?? 配制方法 ?⑴ 将一袋培养基全部倒入一容器中,用少量注射用水将袋内残留培养基洗下,并入容器.加 注射用水(水温20℃～30℃)到47.5升,轻微搅拌溶解. ⑵ 加入185克碳酸氢钠. ⑶ 轻微搅拌溶解,加注射用水至50升. ⑷ 用1mol / L 氢氧化钠溶液或 1mol / L盐酸溶液调pH至所需值. ⑸ 用0.2μm滤膜正压过滤除菌. ⑹ 溶液应在2℃-8℃下避光保存. ? 贮藏 ?2℃-8℃冷藏,干燥,密封,避光贮藏.