β酪啡肽7功效学研究进展课件.ppt

β-酪啡肽-7功效学研究进展 营养与食品卫生 M150879 吴鹏 目录 一、β-酪啡肽的简介 （1） 酪啡肽的定义 （2） β-酪啡肽的发现 （3） β-酪啡肽的结构特征 二、 β-酪啡肽-7的制备（分离、纯化、鉴定） 三、 β-酪啡肽-7的主要生理功能及研究进展 四、展望 酪啡肽的定义 酪啡肽又称酪蛋白吗啡、酪蛋白阿片肽、外啡肽，是酪蛋白在消化酶作用下释放的，能被机体直接吸收，具有多种生物学功能的乳源生物活性肽之一。是重要的乳源阿片肽。它具有行为调节及免疫调节作用，能抑制肠道运动，促进胰岛素分泌，对产乳及内源性器官发育生长因子有协同作用。 酪蛋白是乳中最重要的成分。乳源生物活性肽是酪蛋白在消化酶作用下释放的，能被机体直接吸收，具有多种生物学功能。其中酪啡肽是最重要的乳源生物活性肽之一。β-酪啡肽-7(beta-asomor-phin-7p）是从牛乳β-酪蛋白的酶解产物中分离出来的具有阿片活性的七肽物质，为β-酪蛋白第60 -66氨基酸残基片段。 β-酪啡肽的发现 1979年，Brantl等在豚鼠回肠纵肌肠肌中分离到一个牛乳酪蛋白的酶解产物，其是一个含有7个氨基酸残基的寡肽，命名为β-酪啡肽-7，序列为Tyr-Pro-Phe-Pro-Gly-Pro-lle，为牛β-酪蛋白第60-66位氨基酸残基片段，它具有很高的阿片活性，能够与u型阿片受体结合。后来人们又发现了β-酪啡肽-4、 β-酪啡肽-5、 β-酪啡肽-6、 β-酪啡肽-8、 β-酪啡肽-11。 β-酪啡肽的发现 β-酪啡肽的结构特征 牛β-酪啡肽是由牛β-酪蛋白分解产生的含有3-11个氨基酸的多肽，都是以牛β-酪蛋白的第60位的酪氨酸作为起始氨基酸;人的β-酪啡肽的结构和牛的非常相似，在N端都具有Tyr-Pro-Phe（酪氨、脯、苯丙）的序列。目前科学家发现了多种长度的β-酪啡肽，其主要包括β-CM-4,β-CM-5 ,β-CM-6,β-CM-7 ,β-CM-8和β-CM-11，研究表明:对于所有含有不同数量氨基酸残基的β-酪啡肽，在N-末端含有相同的氨基酸序列Tyr-Pro-Phe，这对于保持β一酪啡肽的生物活性是非常重要的。在酶促降解方面β一酪啡肽是非常稳定的，其能够抵抗多种蛋白酶(如胃蛋白酶和胰蛋白酶)的降解，这种特性与其肽链中富含脯氨酸有关。 β-酪啡肽-7的制备 人和动物乳被认为是最接近完美的食品，酪蛋白是乳中最主要的蛋白，占乳蛋白的80%左右。这些生物活性肽本身以非活性状态存在于蛋白质氨基酸序列之中，当在一定条件受蛋白酶作用下，可形成有活性的生物活性肽。β一酪啡肽-7是从牛乳β-酪蛋白的酶解物中分离出来的具有阿片活性的一个七肽物质。 β-酪啡肽-7的制备 一、酪蛋白酶解 方法：称取600mg酪蛋白，加双蒸水溶解，另加少量NaOH助溶;待酪蛋白充分溶解后加少量HC1，定容。称取胃蛋白酶，使酶与底物浓度之比为1:25;于37℃水浴保温，实验组保温时间分别作用60min, 90min, 120min, 150min;酶解结束后加入15%三氯乙酸终止反应，取上清，用NaOH调整pH至7.1。 二、反相高效液相色谱（RP-HPLC）鉴定酪蛋白酶解产物中的β-CM-7 方法： 1.待测液的预处理:取各时间点酪蛋白酶解液的上清液2m1，经0.22um微孔滤膜过滤，用于RP-HPLC分析。 2.用缓冲液平衡层析柱，待运行结果显示稳定的基线时，分别取各时间点的20ul酪蛋白酶解上清液手工进样。 3.检测波长215nm，流速0.75，线性洗脱运行30min。 4.将加样酪蛋白酶解上清液换成β-CM-7标准品，制定标准峰。 5.内标法检测:在待测样品中加入标准β-CM-7溶液，用以增强待测样品的分析结果。 三、葡聚糖凝胶 （Sephadex）G-15凝胶层析分离纯化酪蛋白酶解上清液 结果：120min酪蛋白酶解上清液，经葡聚糖凝胶G-15层析结果图，在215nm消光读数，绘制的洗脱曲线。收集不同组分洗脱液，按管号为6-19, 20-35, 36-50，51-73, 74-89, 90-120加以合并，得到6个组分。其中第六组分(箭头所指)中最有可能含有β-CM-7等小分子物质。 三、 β-酪啡肽-7的主要生理功能及研究进展 酪啡肽的主要生理功能： 1.对胃肠道运动的影响(降低收缩力，抑制葡萄糖吸收等) 2.对免疫功能的影响（促进免疫器官发育等） 3.对生殖内分泌的影响（影响动物发情、排卵、性成熟等） 4.对采食的影响（增加高脂饲料采食等） 5.镇痛、镇静作用（作用同吗啡，镇静止痛、诱导睡眠） 6.对神经系统的作用（促进神经母细胞瘤神经细胞的生长） 7.其它作用（导致健忘症，抗焦虑） 研究进展 （1）Brantl等发现β-酪啡