PECAM1基因多态性对静脉血栓易感性的影响及其参与H_2S抗血栓作用的机制研究《山东大学》2014年博士论文.doc

PECAM-1基因多态性对静脉血栓易感性的影响及其参与H_2S抗血栓作用的机制研究--《山东大学》2014年博士论文 研究背景： 由遗传基因突变参与的凝血机制异常,有研究认为遗传基因突变多于30%的个体参与了深静脉血栓的发生发展过程。对这类基因多态现象的研究已经成为热点,特别是与人类血管性常见疾病——深静脉血栓之间的关联性已做了相当深入的研究：发现越来越多的基因多态现象参与了凝血机制的调节,并与静脉血栓的形成构成相关性。近年来已有报道PECAM-1基因与动物小鼠DVT的关系研究,并得出其与血栓严重程度相关的研究结果。血小板内皮细胞黏附分子-1(PECAM-1)已确定11个单核苷酸多态性(SNP),目前PECAM-1基因只有3个SNP被发现与疾病有关,即Leul25Val, Asn563Ser,ly670Arg。为了进一步探索PECAM-1基因与临床深静脉血栓患者的相关性,我们从基因水平研究了其多态现象对静脉血栓易感性的影响(第一部分)；同时借助动物实验,进一步探索了PECAM-1在协助气体信号分子H2S抗血栓形成中的作用机制(第二部分)。本课题以临床病例为基础,利用动物实验的特别优势,采用可靠的试验方法对血栓的发生发展涉及到的PECAM-1分子机制进行了深入探讨,以期得到一些对深静脉血栓诊治具有更多帮助的研究成果,而这方面的研究目前国内外尚未见报道。 通过文献检索,PECAM-1基因Leul25Val多态性多有报道与动脉粥样硬化性疾病如冠心病、心肌梗死相关性的研究文章,但研究结果并不一致,为了从循证医学(EBM)的角度明确PECAM-1基因Leul25Val多态性与某些血管性疾病是否具有关联关系,我们对此进行了荟萃分析(第三部分),作为文献综述的补充,以期进一步了解该基因与临床已知易感疾病的范围。 第一部分PECAM-1基因Leu125Val多态性对深静脉血栓易感性影响的研究 深静脉血栓(DVT)和肺栓塞(PE)又称静脉血栓栓塞症(VTE)。深静脉血栓和肺栓塞被认为是同一疾病的两个不同阶段。深静脉血栓是一种临床常见疾病,年发病率在千分之一以上。下肢深静脉血栓如不能得到及时有效的治疗,常会演变为深静脉血栓后综合征(PTS),严重影响患者生活质量。DVT被认为是遗传、环境及行为活动共同作用的结果。有研究表明,血小板在内皮细胞的黏附是启动和促进静脉血栓形成的关键环节。当血管内膜损伤时,血小板通过快速聚集和黏附在损伤部位使受伤内膜得以修复。目前关于细胞粘附分子与深静脉血栓形成的关系机制尚未完全了解,细胞粘附分子特别是血小板内皮细胞粘附分子-1的作用正成为研究热点。 PECAM-1是分子量达130-kDa的细胞表面糖蛋白,又名CD31,属于细胞粘附分子免疫球蛋白超家族成员。PECAM-1主要功能是介导内皮细胞间及细胞与细胞外基质间的黏附；介导内皮细胞与白细胞间的黏附；介导细胞内外的信号转导、血管炎症反应以及白细胞跨内皮迁移,并与其它黏附因子之间发生受体配体反应,继而对血小板的聚集、活化与释放功能,对原发或继发血栓的形成和发展产生影响。有实验表明,PECAM-1基因敲除小鼠DVT模型显示出更大的血栓和更长的血栓消退时间,具有更高水平的血浆sPECAM-1者则出现血栓溶解的明显延迟。 目的与方法 本研究通过病例-对照设计,采用聚合酶链反应—限制性片断多态性技术同时检测了PECAM-1Leul25Val、Asn563Ser、Gly670Arg三个多态位点的组间分布,用酶联免疫吸附方法测定相应个体血浆sPECAM-1水平。结合彩超检查评分首次探讨了sPECAM-1三种基因特别是基因型Leul25Val多态性位点及其血浆sPECAM-1水平与深静脉血栓发生发展的关系,目的探索预测和防治DVT的新方法,为DVT高危个体的早期筛查提供新的遗传标记。 结果 通过研究分析DVT组和对照组PECAM-1Leul25Val, Asn563Ser,及Gly670Arg基因频率和等位基因频率,DVT组多态性位点Leul25Val基因型Leu/Leu、Leu/Val、Val/Val频率分别为12.2%、47.8%、40.0%,等位基因频率Leu、Val分别为36.1%、63.9%；对照组相应基因型频率为24.0%,53.9%,22.1%,相应等位基因频率为51.0%、49.0%；方差分析表明Leul25Val基因型频率与等位基因频率的多态性比较有显著不同(P0.01)；DVT组Leul25Val基因型及等位基因明显高于对照组(X2=10.25, P0.01; X2=9.85, P0.01)。同时,进一步研究发现与基因型Leu/Leu比较,基因型Val/Val与DVT的风险增加相关最为明显(OR=3.57;