临床免疫学检验的质量保证课件.pptVIP

加样 ◎样本稀释，目的是为了减少非特异性反应，所以一定要先加稀释液后加样本，特别注意加样后要在微量振荡器上振荡30秒钟，同时注意防止液体溢出。如后面操作步骤中加二种以上试剂时均需振荡混匀。 ◎如用滴瓶滴加试剂应先将滴瓶摇匀并挤去第一滴有气泡的试剂后加样。 ELISA竞争法的本质：酶标抗体与样本抗体在同样体系中，与固相抗原竞争结合是等比例关系。 正确的加样：应该先将样本与酶标抗体混合均匀，然后加入孔中反应。 实际工作中 分开加 分开加会造成先加入的先结合，与后加入者并不是公平竞争关系，也不符合等比例原则。特别是在放置时间过长，温度过高的情况下，对结果的影响很大。 有研究表明，2min后加入酶标抗体，由于标本比酶标抗体先结合了2min，因此可出现7.4%的假阳性。30min后再加，假阳性率高达57.4%。 温育 在ELISA中一般有两次抗原抗体反应，即加标本和加酶结合物后的显色反应。 温育常采用的温度有43 ℃、37 ℃、室温和4 ℃（冰箱温度）等。37 ℃是实验室中常用的保温温度，也是大多数抗原抗体结合的合适温度。 洗涤 洗涤在ELISA过程中虽不是一个反应步骤，但却也决定着实验的成败。 ELISA是靠洗涤来达到分离结合与未结合抗原抗体复合物及酶标记