不同季节红叶石楠的叶绿素含量的变化.doc

不同季节红叶石楠的叶绿素含量的变化 实验器材：电热恒温水浴槽 离心机 紫外可见分光光度计 电子天平 超声波清洗剂 研钵 具塞试管 试管架 5ml移液管 2ml移液管 滴管试管 剪刀 比色皿 洗耳球 烧杯 量筒 滤纸 称量纸 实验试剂：提取液（80%丙酮：95%乙醇为2:1） CaCO3 石英砂 蒸馏水 实验材料：新叶（变红，即红色）：选取栽培条件、树体大小一致，健壮新梢3~5叶位 老叶（无变红，即绿色）：选取栽培条件、树体大小一致，健壮新梢3~5叶位 测定方法： 研磨法 取新鲜叶片，洗净擦干，除去粗大的叶脉，将叶片剪碎，称取1g放入研钵中加提取液5ml,少许CaCO3和石英砂，研磨5min成匀浆加入到离心管中，再加入5ml 提取液，清洗研钵，然后加入离心管中重复2次，然后以3000r/min离心3min后进行检测。（若检测出的数值大于1，则则取上述色素提取液3ml再加入提取液10ml稀释后转入比色皿中，摇匀）以提取液为参比，利用紫外可见分光光度计，分别在645nm和663nm测定光密度，计算叶绿素a 叶绿素b ,叶绿素a+b的含量。实验3次，取平均值。 2. 直接浸提法 取新鲜叶片，洗净擦干，除去粗大的叶脉，将叶片剪碎，称取1g放入20?mL具塞试管中,用提取液定容至刻度,于暗柜中静置48h浸取, 以3000r/min离心3min后进行检测。（若检测出的数值大于1，则则取上述色素提取液3ml再加入提取液10ml稀释后转入比色皿中，摇匀）以提取液为参比，利用紫外可见分光光度计，分别在645nm和663nm测定光密度，计算叶绿素a 叶绿素b ,叶绿素a+b的含量。实验3次，取平均值。 3.加热浸提法 取新鲜叶片，洗净擦干，除去粗大的叶脉，将叶片剪碎，称取1g放入20mL具塞试管中,放入水浴锅50℃加热5h，将其转入离心管，以3000r/min离心3min后进行检测。（若检测出的数值大于1，则取上述色素提取液3ml再加入提取液10ml稀释后转入比色皿中，摇匀）以提取液为参比，利用紫外可见分光光度计，分别在645nm和663nm测定光密度，计算叶绿素a 叶绿素b ,叶绿素a+b的含量。实验3次，取平均值。 4.超声波研磨法 取新鲜叶片，洗净擦干，除去粗大的叶脉，将叶片剪碎，称取1g放入研钵中加提取液5ml,少许CaCO3和石英砂，研磨5min成匀浆加入到离心管中，再加入5ml 提取液，清洗研钵，然后加入离心管中重复2次，然后将超声波清洗机的温度调为50℃，分别加热20min，40min，60min。然后以3000r/min离心3min后进行检测。（若检测出的数值大于1，则则取上述色素提取液3ml再加入提取液10ml稀释后转入比色皿中，摇匀）以提取液为参比，利用紫外可见分光光度计，分别在645nm和663nm测定光密度，计算叶绿素a 叶绿素b ,叶绿素a+b的含量。实验3次，取平均值。 5. 超声波浸提法 取新鲜叶片，洗净擦干，除去粗大的叶脉，将叶片剪碎，称取1g放入20?mL具塞试管中,用提取液定容至刻度, 然后将超声波清洗机的温度调为50℃，加热40min然后以3000r/min离心3min后进行检测。（若检测出的数值大于1，则则取上述色素提取液3ml再加入提取液10ml稀释后转入比色皿中，摇匀）以提取液为参比，利用紫外可见分光光度计，分别在645nm和663nm测定光密度，计算叶绿素a 叶绿素b ,叶绿素a+b的含量。实验3次，取平均值。 计算方法： 取待测液，于663 nm与645 nm处测定吸光度值，按照Arnon公式计算叶绿素a和叶绿素b及叶绿素的含量 叶绿素a提取量(mg／g )=[12.7A663—2.69A645] V／ (1000·W) 叶绿素b提取量(mg／g)= [22.9A645-4.68 A663]V／ (1000·W) 叶绿素总提取量(mg )=叶绿素a提取量+叶绿素b提取量 式中：A663——波长663 nm处的吸光度 A645——波长645 nm处的吸光度 V——提取液的体积(mL) W一 叶片质量(g) Arnon DL Copper enzymes in isolated chloioplastspolyphenol oxidase in Beta vulgaris[J]．Plant Physiology，1949，24：1-5 实验数据记录： 直接浸提法 53h 3月20日~3月22日 波长 A645 A663 绿色 0.551 0.525 0.816 0.510 0.756 0.476 平均值 0.708 0.504 红色 0.299 0.247