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从糖蜜酒精废水中提取抗氧化和清除自由基的活性颜料 摘要 用大孔树脂吸附法从糖蜜酒精废液提取色素。并且对颜料的抗氧化和清除自由基的活性进行了研究。大孔树脂吸附的五个特性，包括HPD-600, HPD-500, D301-R, NKA-IIand D296-R进行了研究表明HPD-600是最适当从糖蜜酒精废液中提取的色素。用硝酸，羟基自由基，超氧阴离子自由基和1，1-二苯基-2-三硝基苯肼（DPPH）在外部环境进行模型系统，从而对从酒精废液中提取的色素的抗氧化和清除自由基的活性进行评估。色素提取物浓度依赖于自由基所在系统的清除活性。同时，DPPH体系中色素的提取物的活性被发现( P 0.05) 高于其他系统，其50％抑制浓度（IC50值）为0.07毫克/毫升。色素提取物的IC50值大于10毫克/毫升时清除超氧阴离子自由基的作用是非常微弱。 关键词：糖蜜酒精废水;颜料;自由基，抗氧化活性 1前言 糖蜜是发酵工业最重要的原料之一在于于其低廉的成本和广泛可用性。甘蔗糖厂的糖蜜是一个丰富的资源，因为它是生产酒精的发酵过程的主要原材料。甘蔗糖蜜含有2％深褐色的色素名为黑精，影响酒精废水的颜色。黑精是Maillard反应的最终产品之一是由低和高的分子量聚合物组成，这是一个非酶褐变反应之间的反应产生的还原糖和氨基化合物。同时，从上述产业的糖蜜酒精废水中除了其他着色剂，如酚，饴糖和黑色素仍含有类黑精色素。甘蔗糖蜜废水中含有丰富的酚类化合物。甘蔗糖蜜酒精生产可能会导致大量废水，引起严重的环境关注。其废水特点具有极其高化学需氧量（COD），生化需氧量（BOD）和深褐色。运用活性污泥系统，曝气法和厌氧池的正常的生物处理很难使这些颜料脱色。对各种物化方法进行了探讨，如活性炭吸附，膜处理和氧化处理，但成本高，使得这些方法很难被采用。因此，找到一种去除这种色素的方法是很重要的。 根据许多研究报告说，甘蔗提取物具有良好的抗氧化活性。虽然据报道，黑精和酚类化合物具有强的抗氧化剂，但从糖蜜酒精废液色素的抗氧化活性来说这一点信息基本是不可用的。因此，本研究的目的是从糖蜜酒精废液色素的提取和纯化，并评估其抗氧化和自由基的活性。 2材料的和方法 2.1颜料浓缩浆的制备 糖蜜酒精废水是从以甘蔗糖蜜为原材料的金广糖甘蔗厂(中国广西）采集的。然后过程是进行离心预处理（8000克10分钟）以去除不溶性物质。颜料通过膜过滤进一步得到浓缩浆分子量达30000。 2.2大孔树脂对色素的吸附 大孔树脂HPD-600，HPD-500，D301-R，NKA-II and D296-R被用来作为吸附剂。其物理性能列于表1。大孔树脂及丰富的蒸馏水用来除去盐和杂质。吸附实验前，吸附剂用乙醇洗涤，然后用蒸馏水取代乙醇进行最后的洗涤。 大孔树脂从糖蜜酒精废液色素的吸附试验进行如下：颜料浓缩浆用蒸馏水稀释20倍与碱液混合，分别在250毫升锥形瓶中加入五个不同的大孔树脂（2.0克），盖上盖子。再加入稀释色素溶液（100毫升）。然后瓶被放置在太赫兹-82A型号摇床摇匀了（130转），2小时后在25°C下用紫外/可见分光光度计在560 nm的波长使用蒸馏水作为空白测定溶液的吸光度。根据下面计算吸附率的公式： （2—1） 其中Ar是测试样品（％）的吸附率，A0是色素吸附前溶液的吸光度，A1是色素吸附后溶液的吸光度。 2.3解吸试验 解吸过程进行了如下：HPD-600大孔树脂吸附2.0 g用蒸馏水清洗，然后加入100毫升乙醇水溶液（分别为20％，40％，60％）在250毫升锥形瓶中进行解析。瓶被放置在太赫兹-82A模型摇床和摇匀（130转），2小时后在25°C下用紫外/可见分光光度计测定吸光度。按照下列式子计算解吸率： （2—2） 其中Dr是解吸率（％），A0是色素吸附前溶液的吸光度，A1是色素吸附后溶液的吸光度。A2是解吸后色素乙醇溶液的吸光度。 2.4色素的提取制备 大孔树脂吸附颜料进行浓缩处理，然后污水被集中在一个旋转真空蒸发）在45℃解吸后。冷冻干燥得到的粉状色素进行提取。 2.5抗氧化活性的测定 2.5.1亚硝酸盐的去除 Saha,Lajis,and Israf(2004)and Zhang, NieTao,and Ye(2002)对此方法进行了一些修改。对色素的提取与蒸馏水稀释到合适的浓度进行分析。三毫升的颜料加入到样品管（10毫升），然后加入2毫升柠檬酸缓冲液（pH值3.0）和分别加入0.1毫升200微克/毫升亚硝酸钠，最后加水至十毫升。混合物立即水浴在37°C保温60分钟。Griess试剂等体积（磺胺1％，0.1％的N-（1 - 萘基）乙二胺盐酸，2.5％磷酸）的加入上述混合物。吸光度在10分钟后用紫