2第二章色谱法的原理-1题库.ppt

2.3.3 高效液相色谱速率理论 填充色谱柱的填料粒径比较大，固定相液膜厚度也很小，简化公式：H = Au0.33 + Cu。 色谱柱填充不好导致涡流扩散项A增加，柱效下降（色谱柱填充技术非常关键）。 小粒径填料利于柱效的大幅度提高，如图2-14 H-u图 (p33)。 H H 粒 径 柱 内 径 液相色谱柱 H越小，柱效越高 1) 填料粒径越小，柱效越高； 2) 柱内径越小，柱效越高。 * * （7）容量因子（capacity factor）：是溶质与固定相相互作用强度的直接量度，以k表示，由下式定义： （8）相对保留值（relative retention）：在一定色谱条件下被测化合物（i）和标准化合物（s）调整保留时间之比。相对保留值越大，越容易分离。 （9）保留指数（retention index）：气相色谱中化合物在一定温度下在某种固定相上的相对保留值，是以一系列正构烷烃作为标准的相对保留值。定义如下： （10）保留指数差（retention index）：化合物x在某一固定相s上测得的保留指数减去其在角鲨烷固定相上测得的保留指数，叫做化合物x在固定相s上的保留指数差。定义如下： P22  t’R(x)---待测物X的调整保留时间 t’R(z)---碳原子数为Z的正构烷烃的调整保留时间 t’R(z+n)---碳原子数为z+n的正构烷烃的调整保留时间 t’R(z) ≤t’R(x)≤ t’R(z+n) （通常 n=1） 规定正构烷烃的I 值是原子数的100倍， 如：正庚烷I=700 保留指数的另一计算公式形式 保留指数计算例题 在DMS（二甲基环丁砜）固定相上，柱温50℃时，测得某组分的调整保留时间t’R(x)=1.99 min，戊烷的调整保留时间t’R(Z)=1.00 min，庚烷的调整保留时间t’R(Z+2)=2.45 min，求算被测组分的保留指数。 IDMS=100 [5+2 (lg1.99-lg1.00)/(lg2.45-lg1.00)]=653 2.2.4相比 色谱柱中流动相与固定相体积之比 β = VG / VL VG 色谱柱中流动相的体积，VL 色谱柱中固定相的体积 推导出 k = K/β 2.2.5分离度 也称为分辨率或分辨度，是色谱图中相邻两峰分离程度的量度，分离度越大，分的越开。 两个相邻色谱峰的分离度R(resolution)定义为两峰保留时间差与两峰峰宽平均值之商，即 1）分离度为1时，两峰峰面积有5%重叠，分开程度95%； 2）分离度为1.5时，分开程度99.7%，达到基线分离； 3）分离度大于2.0就可以认为是完全分离了。 R=2 分离程度达=100% 完全分离 R=1.5 分离程度达=99.7% 也叫基线分离 　 R=1 分离程度达95% 　　 R1 二峰明显重叠 定量分析的前提 色谱分离中的四种情况 ① 柱效较高，△K(分配系数)较大，完全分离； ② △K不是很大，柱效较高，峰较窄，基本上完全分离； ③ 柱效较低，△K较大，分离的不好； ④ △K小，柱效低，分离效果更差。 半高峰宽分离度（R1/2）与R近似，计算公式中用半高峰宽代替峰宽度。 2.2.6色谱柱的柱效 常以理论塔板数(n)或理论塔板高度(H)表示 1）理论塔板数的计算 (单位: /m) 2）理论塔板高度 H=L/n L: 色谱柱长 理论塔板高度的常用单位：微米 3）有效理论塔板数(neff)和板高(Heff) 消除了死体积的影响，表示色谱柱的实际柱效 Heff = L/neff 2.2.7分离度、柱效、容量因子间的关系 P24-25 令Wb(2)=Wb(1)=Wb（相邻两峰的峰底宽近似相等），引入相对保留值a和有效塔板数，可导出下式： 计算题1： 已知物质A和B在一根30.0 cm长的柱上的保留时间分别为16.40和17.63 min，峰宽分别为1.11和1.21 min。不被保留组分通过该柱的时间为1.30 min。 计算： 　　(1) 柱的分离度； 　　(2) 柱的平均塔板数； 　　(3) 塔板高度； 　　(4) 达到1.5分离度所需的柱长度。 解：(1) R=2(17.63-16.40)/(1.11+1.21)=1.06 (2) nA=16(16.40/1