05第五章食品添加剂的检验辩析.ppt

Ⅲ显色 溶剂系统: 硅胶G薄层板:正己烷二氧六环一乙酸(42+6+3)，异辛烷一丙酮一乙酸(70+5+12), 聚酰胺板: a) 甲醇一丙酮一水(30+10+10); b) 甲醇一丙酮一水(30+10+12. 5); c) 甲醇丙酮一水(30+10+15). 对甲醇一丙酮一水系统，芝麻油只能用a)菜籽油用b)，食品用c. 展开系统中水的比例对花生油、豆油、猪油中PG的分离无影响。 将点好样的薄层板置预先经溶剂饱和的展开槽内展开16 cm, 展开： 硅胶G板：自层析槽中取出，薄层板置通风橱中挥干至PG标准点显示灰黑色斑点，即可认为溶剂已基本挥干，喷显色剂，置110℃烘箱中加热10 min，比较色斑颜色及深浅，趁热将板置氨蒸气槽中放置30 s，观察各色斑颜色变化。 聚酰胺板：自层析槽中取出，薄层板置通风橱中吹干，喷显色剂，再通风挥干，直至PG斑点清晰。 Ⅳ 评定 定性：根据试样中显示出的BHT,BHA,PG点与标BHT,BHA,PG点比较Rf值和显色后斑点的颜色反应定性。如果样液点显示检出某种抗氧化剂，则试样中抗氧化剂的斑点应与加人内标的抗氧化剂斑点重叠；当点大量样液时由于杂质多，使试样中抗氧化剂点的Rf值略低于标准点。这时应在试样点上滴加标准溶液作内标，比较Rf值。 概略定量及限度试验： 根据薄层板上样液点抗氧化剂所显示的色斑深浅与标准抗氧化剂色斑比较而估计含量，如果在第一块的硅胶G薄层板上，试样中各抗氧化剂所显色斑浅于标准抗氧化剂色斑，则试样中各抗氧化剂含量在本方法的定性检出限量以下(BHA,PG点样量为6.0 uL,BHT点样量为30. 0 uL)。如果在 第二块的硅胶G薄层板上，试样中各抗氧化剂所显色斑的颜色浅于标准抗氧化剂色斑，则试样中各抗氧化剂的含量没有超过使用卫生标准(BHA,PG点样量1.5uL,BHT点样量为3. 6 uL)。如果试样点色斑颜色较标准点深，可稀释后重新点样，估计含量。 ③结果计算 试样中抗氧化剂(以脂肪计)的含量按下式进行计算。 m1 ×D × 1 000 X=----------------------------------------- m × V2/V1 × 1 000× 1 000 式中: X— 试样中抗氧化剂BHA,BHT,PG(以脂肪计)的含量，单位为克每千克(g/kg); m1— 薄层板上测得试样点抗氧化剂的质量，单位为微克(ug) ; V1— 供薄层层析用点样液定容后的体积，单位为毫升(mL) ; V2— 滴加样液的体积，单位为毫升(mL) ; D— 样液的稀释倍数; m— 定容后的薄层层析用样液相当于试样的脂肪质量，单位为克(g)。 第三法比色法 1)叔丁基羟基茴香醚(BHA)的测定 2)2，6一二叔丁基对甲酚(BHT)的测定 1)叔丁基羟基茴香醚(BHA)的测定 ①原理 利用样品经石油醚提取后，根据BHA石油醚相和含水乙醇相中分配系数的不同，使BHA转人72％乙醇相中，再与2，6一二氯醌氯亚胺的硼砂溶液作用，生成一种稳定的蓝色化合物，其颜色深浅与BHA的量成正比，于620nm处测定吸光度与标准比较定量。 ②仪器和试剂 仪器：分光光度计 试剂： a．2，6-二氯醌氯亚胺乙醇溶液 (0.1g/L) b．硼砂溶液 (20g/L)； c．72%乙醇溶液。 d．石油醚：沸程30~60°C。 e．无水乙醇。 f．BHA标准储备溶液（ lmg /mL）。 g．BHA标准使用液：1.0μg和5.0 μg /mL 。 ③操作步骤 BHA标准曲线的绘制 :准确吸取每毫升含1.0μg的BHA标准使用溶液0.0、1.0、3.0、5.0、7.0、9.0mL，另吸取每毫升含5.0μg的BHA标准使用溶液3.0、4.0、5.0、6.0、7.0mL，分别置于25mL比色管中。然后分别加入72%乙醇溶液至总体积为8mL，摇匀，加入0.1g/L的2，6-二氯醌氯亚胺乙醇溶液lmL，充分混匀后加入硼砂缓冲溶液lmL，摇匀后静置20min，于分光光度计620nm处测定吸光度，并绘制标准曲线。 样品测定:准确称取经粉碎的样品10g，置于150mL带塞三角瓶中，加入石油醚50mL，于振荡器上振荡20min，静止。吸取上层清液25mL置于分液漏斗中，以72%乙醇溶液15、10、10、10mL分次抽提，收集乙醇溶液层于50mL容量瓶中，并用72%乙醇溶液定容至刻度，混匀。吸取样品乙醇溶液4mL，加入72%乙醇溶液至总体积为8mL，摇匀，加入0.lg/L的2，6-二氯醌氯亚胺乙醇溶液lmL，以下按标准曲线绘制操作，测得吸光度值，并从标准曲线上查出相应的BHA含量。 ④结果计算