光的反射的研究.ppt

* * * * * * * * * 柱切换高效液相色谱技术是指由阀来改变流动相走向与流动相系统，从而使洗脱液在一特定时间内从预处理柱进入分析柱的技术。 用两个或两个以上柱子连接构成色谱网络系统，使不同柱子达到不同分离目标，柱子间用切换阀联结，这就是柱切换技术。 基本原理是首先在预柱上实现生物体液中干扰大分子与待测药物的分离，然后用柱切换将待测药物从预柱转移至分析柱上完成色谱分析。 在线生物样品制备-柱切换高效液相色谱法 （五）、化学衍生化 1、使药物变成能被分析的性质 2、提高检测灵敏度 3、增强药物稳定性 4、提高对光学异构体分离的能力 气相色谱衍生化 液相色谱衍生化 衍生化方法 硅烷化、酰化、烷基化—气相色谱衍生化方法 紫外衍生化、荧光衍生化、电化学衍生化、手性衍生化—液相色谱衍生化方法 柱前衍生 柱后衍生 三、生物样品定量分析方法验证 1、特异性：空白、空白加样、用药后的谱图 2、标准曲线和线性范围：介质相同、包含所有浓度点 3、精密度与准确度：高中低三个浓度 4、定量下限：一般最高浓度的1/10-1/20 5、样品稳定性：冰冻、冻融稳定性、复溶溶液稳定性 6、提取回收率：高、中、低浓度 7、质控样品：随行标准 8、质量控制：生物样品测定 分离条件的筛选 在进行分离条件筛选时，应考察生物基质中的内源性物质及代谢产物对分离与检测的干扰，步骤如下： 1．空白溶剂试验 ——溶剂(方法特异性) 2．空白生物基质试验 —— 内源性物质干扰(方法特异性) 3．模拟生物样品试验 —— 方法验证（效能指标） 4．实际生物样品测试 —— 代谢产物(方法特异性) （一）、方法特异性(专属性或选择性) 方法的特异性(specificity) ——又称专属性或专一性，通常与选择性(selectivity)互用 ——系指当有内源性物质存在时，方法准确测定待测物质的能力 专属性——表示所检测的信号(响应)系属于待测药物所特有的 选择性——系指将待测物质与其代谢物及同服的其它药物加以区分(分离)的能力 考察一个分析方法是否具有特异性，应着重考虑以下几点：1. 内源性物质的干扰比较——待测药物或其活性代谢产物检测信号；2. 代谢产物的干扰比较——模拟生物样品和用药后的实际生物样品的检测信号；3. 伍用药物的干扰还要考虑患者可能同时服用药物(通常为数有限)的干扰。提供三张色谱图，空白生物样品图、空白加对照、实际生物样品图 （二）、标准曲线与线性范围 标准曲线（standard curve） ——生物样品中所测定药物浓度与响应的相关性 ——除少数方法（免疫分析法）外，标准曲线通常为线性模式 ——回归分析法为最小二乘法或加权最小二乘法 线性范围——标准曲线的最高与最低浓度的区间 ——模拟生物样品的测定结果应达到试验要求的精密度和准确度 标准曲线要求 标准曲线——用模拟生物样品（与待测的含药生物样品相同的生物基质）建立 ——线性范围(不包括零点)应能覆盖全部生物样品的药物浓度 ——不能使用外推的方法求算未知生物样品中的药物浓度 —— 要求最低浓度点的偏差在±20%以内、其余各浓度点的偏差在±15%以内。 （三）、准确度 方法准确度 ——系指用该方法测得的生物样品中待测药物的浓度与其真实浓度的接近程度 ——应使用实际生物样品测定，但实际生物样品的浓度是未知的，所以通常使用模拟生物样品测定 ——一般用相对回收率表示 测定： 取高(接近上限)、中、低（定量下限的3倍以内）3个浓度，每一浓度至少5个样本，与随行的标准曲线同法测定、计算方法回收率 限度要求： ——相对回收率应在85%～115% (LOQ附近80%～120%) ——RE在±15% (LOQ附近为±20%) （四）、精密度 方法精密度(precision ) ——系指每次测定结果与多次测定的平均值的偏离程度 ——表示该分析方法的可重复性 ——反映分析方法的可操作性，是方法验证的基本要点 实际生物样品的量有限(如血浆，一般为0.5～2ml) ——使用模拟生物样品测定 测定法 照准确度项下方法，取空白生物基质(如血浆)数份，分别在同一批内和不同批间制备高、中、低 3个浓度的QC样品，并分析测定 批内RSD ——每一浓度5个样品，每个样品测定1次，用随行标准曲线分别计算3个浓度及RSD 批间RSD ——每1分析批内每一浓度制备1个样品，每个样品测定1次；在不同天连续