第7章原生质体培养和体细胞杂交.pptVIP

第7章 原生质体培养与 体细胞杂交 本章教学目的与要求 (1)了解原生质体培养的意义； (2)掌握原生质体分离的大致步骤； (3)掌握原生质体培养的方法； (4)掌握原生质体融合的方凑。 原生质体（Protoplast） 含义：去掉细胞壁的由质膜包裹、具有生活力的裸露细胞。 第一节、原生质体分离及纯化 一、原生质体分离 多数植物分离原生质体的经典材料-----叶肉细胞。 1、机械分离法（Machanical isolation） （2）酶液的配制 （3）分离原生质体 二、 原生质体纯化与活力测定 1、 离心沉淀法 原理：应用原生质体的比重大于溶液，离心后原生质体沉于底部。 步骤： 第一步原生质体溶液用400目网筛过滤。 第二步离心（500-1000r/min，离心5-6min）。 第三步吸去上清液，洗涤液重新悬浮，再离心沉淀。如此2-3次。 第四步用原生质体培养液洗1次，收集原生质体。 2、漂浮法 原理：应用渗透剂含量较高的洗涤液使原生质体漂浮在液体的表面。 步骤： 第一步：400目网筛过滤。 第二步：离心。 第三步：吸去上清液，洗涤液重悬，离心沉淀。2-3次。 第四步：收集溶液表面原生质体，用培养液洗1次。 1、形态识别：形态上完整，呈圆形，含有饱满的细胞质，颜色鲜艳的即为存活的原生质体。 2、染色识别 1）0.1%酚番红或Evans蓝染色：