第一章分子生物学实验基本知识简介和仪器设备使用探究.ppt

任课教师和实验员：张运峰 分子生物学 实验 次序 实 验 名 称 周次 学时 备注 1 课程基本情况简介和常规仪器使用 1 2.0 2 质粒DNA的微量提取（碱裂解法） 1 4.0 3 琼脂糖凝胶电泳技术的原理和方法 1 4.0 4 质粒DNA的限制性内切酶酶切及分析鉴定 2 6.0 5 大肠杆菌DH5α感受态细胞的制备 1 4.0 6 质粒DNA的转化及转化子筛选 2 6.0 7 细菌菌落的聚合酶链式反应(PCR) 2 6.0 一、实验安排 以完整、常用、重要为原则，经典与先进技术相结合，同时介绍相关知识，尽量让学生在有限的学时内掌握更多的分子生物学技术以及相关的知识。 我们的分子生物学实验课程的设计从整体上可以说是一个完整的大实验，因为自始至终，各实验之间相互连贯，要求学生每一次实验既本次实验的结果，同时也为下一次更深入的实验做准备 二、课程基本情况 1.课程基本技术 核酸的分离和纯化； 电泳技术(Gel Electrophoresis)； PCR技术 ( Polymerase Chain Reaction)； 限制性酶切技术 细菌感受态制备技术 质粒转化细菌的筛选和鉴定技术 …….. 2.实验操作基本要求 认真预习实验指导，明确知识难点和技术要点； 严格遵照操作规程使用仪器设备, 注意个人以及公共设施安全；（对设备要有爱惜和敬畏之心，要像对待朋友） 做到节约实验试剂及材料；（像掏自己的钱包） 实验完毕后，注意将实验台面及实验器皿清洗干净，整理好实验记录； （像自己的小家） 准时、保质、保量完成实验工作，不迟到，不早退； 实事求是、认真而及时地书写实验报告。 （1）基本生存规则 ?听从老师的安排，没有获得允许的情况之下，不得随意串桌；不得随意使用别人的试剂和缓冲液；?使用新设备之前，先学会设备的使用技能，注意设备的报警信号;?不要移动周围的东西(试剂、仪器等）；④不要随意放东西，除非属于你的地方;⑤做错了，坦白承认;⑥实验完成以后收拾干净;⑦要求最小的关心。 3.实验室工作守则 （2）着装和发饰 ?统一着白大褂（实验服）；②头发统一扎起来，置后；③不得披散头发，尽量少带头饰。 （3）基本礼仪规则 ?请问，而不是命令，合作而不是隶属；?记下别人给你的全部指导，不要问同一个问题；?预约时间或请求时间。 （4）基本安全规则 ?不要在教室吃东西、喝酒或抽烟；?不要穿短裤、凉鞋，尽量减少暴漏皮肤；?不要用嘴吸吸管；④不做任何你感觉不安全的事；⑤记住紧急的电话和逃生通道的位置；⑥清楚明白一些标志的含义及使用事项。 3.实验报告与评分考虑 2.评分 （1）出勤占20%；（抽查3次） （2）实验操作及结果成绩占 50%； （3）综合技术考核占30%。 1.实验报告（6部分） （1）实验目的；（2）实验原理；（3）实验材料; （4）实验方法和步骤;（5）结果与讨论； （6）实验心得体会。1人/份 三、实验的常规设备简介 1.移液器（枪） 2.高速冷冻离心机 3.PCR仪 4. 凝胶电泳仪 5.凝胶成像仪 6.微量分光光度计 7.分子杂交炉 8.恒温摇床 9.超纯水机 10.干、湿热灭菌器 11.低温和超低温冰箱 12.制冰机 四、实验设计思路 甘油菌培养和活化 获得质粒的检测 实验 质粒DNA提取 质粒的琼脂糖凝胶检测 PCR检测 限制性酶切检测 DH5a感受态细胞制备和保存 P3.5K-EGFP质粒的转化 质粒DNA转化子的鉴定 1.菌落PCR检测 3.酶切检测 4.测序 2.质粒DNA提取和检测 质粒DNA遗传信息和结构特征鉴定 * *