留兰香种质材料超低温保存及遗传变异的分析.docx

摘 要 超低温保存被认为是植物种质资源长期保存最有效的方法。本文以留兰香(Mentha spicata L.)茎尖为材料，对其玻璃化超低温保存条件进行了研究，另外研究了超低温保 存对留兰香材料生理生化反应、基因组稳定性以及 DNA 甲基化的作用。主要研究结果 如下： 1 对留兰香茎尖玻璃化法超低温保存的程序进行了探索研究，结果表明：4℃低温锻 炼 3-4 周，在添加 2 mol·L-1 甘油的 MS 培养基中预培养 3 天，液体预处理培养室温处理 20 min，PVS2 0℃脱水 50 min 时，成活率最高，可达 60%左右。再生植株分化正常。 2 留兰香经超低温处理后与对照组相比丙二醛(MDA)含量显著升高，过氧化物酶 (POD)、过氧化氢酶(CAT)活性均显著增强。上述生理生化指标说明，超低温处理影响 了留兰香的正常生理生化反应，导致丙二醛积累，一些抗氧化酶活性改变。 3 运用扩增片段长度多态性(AFLP)技术对处理再生材料及对照组的基因组 DNA 进 行了分析，在处理组与对照组之间未发现有差异片段。表明在超低温保存过程中没有引 起保存材料基因组 DNA 序列的变化。 4 应用甲基敏感扩增多态性(MSAP)标记技术分析处理与对照组样品之间的甲基化 水平情况。MSAP 技术对超低温处理前后材料的甲基化情况分析表明：与对照相比， 超低温处理后的再生材料均发生了甲基化状态与水平的