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β-半乳糖苷酶的固定化及其应用 摘要： β-半乳糖苷酶是一种来源广泛且具有多种用途的酶。乳糖 Immobilization and Application of β-galactosidase Abstract: β- galactosidase is a enzyme that source are abroad and was used in many filed. DeveloPing an ideal carrier one of the important topics of immobilization study. This paper reviewed the property, application and immobilization of lactase. 关键字： 乳糖酶(Lactase)的系统名为β-D-半乳糖苷半乳糖水解酶(β-D-galactoside galcagal-cato-hydrolase， EC.3.2.1.23)，或称β-半乳糖苷酶(β-galactosidaes)，乳糖酶为其商品名。广泛存在于各种动物、植物及微生物中。β-半乳糖苷酶能够催化β-半乳糖苷化合物中β-半乳糖苷键发生水解反应，将一分子乳糖水解成一分子葡萄糖和一分子半乳糖；另外乳糖酶还能国外对β-半乳糖苷酶的研究较早，多集中在食品加工应用方面。 图1 乳糖酶的水解作用机制 β-半乳糖苷酶的活性位点有两个功能团：巯基和咪唑基，其中巯基可作为广义酸使半乳糖苷的氧原子质子化，咪唑基可作为亲核试剂进攻半乳糖分子的第一个碳原子上的亲和中心。当半乳糖苷的受体是水时，发生的是水解；如果受体是糖时，则可以生成三糖以上的低聚半乳糖。 1.2乳糖酶的不同来源与性质 β-半乳糖苷酶存在于植物尤其是杏、桃、苹果，细菌：大肠杆菌、乳酸菌等，真菌米曲霉、黑曲霉、脆壁酵母、乳酸酵母、热带假丝酵母等,放线菌以及哺乳动物特别是婴儿的肠道中。目前仅来源于微生物的β-半乳糖苷酶有工业应用价值，利用微生物发酵法制取β-半乳糖苷酶，酶源丰富，产量高，生产成本低，周期短，而且不受季节、地理位置等因素的影响 。 1.2.1细菌产生的β-半乳糖苷酶 细菌β-半乳糖苷酶，尤其是嗜热细菌产生的酶正得到广泛的研究。到目前为止，大肠杆菌（Es-cherichia coli)产生的β-半乳糖苷酶研究得最彻底、最深入，并已大量用于生化分析中。其为胞内酶，在培养过程中不能分泌到培养基中，它的耐热性较高，这一点有利于固定化酶的制造。但因产量低及可能的毒性问题，迄今未用于工业化生产[4]。 1.2.2 酵母菌产生的β-半乳糖苷酶 酵母菌产生的β-半乳糖苷酶通常是胞内酶，制备纯品必须破碎细胞[5]。该酶对酸、热较不稳定,当某些离子存在时，才有最大活性，因此不适于在工业上进行应用。但是，酵母菌容易培养，在深层培养条，件下可以大量生成β-半乳糖苷酶，这些优点掩盖了它的不足，故酵母菌产生的β-半乳糖苷酶才得以成功地进行开发。其最适 pH 值近于中性，与牛乳的天然pH 值接近，最适温度较低，适于处理牛乳和甜乳清中的乳糖。脆壁酵母和乳酸酵母（Saccharimyce lactis)是生产β-半乳糖苷酶的主要酵母菌种。 1.2.3 霉菌产生的β-半乳糖苷酶[4] 霉菌产生的β-半乳糖苷酶是胞外酶，可以用固态培养，也可以采用液态深层培养来生产。在培养过程中，酶分泌到培养基中，提取较为方便。霉菌产生的 β-半乳糖苷酶较耐热、耐酸，不需要活化剂和稳定剂，稳定性较高。M.S.Palumbo 等人发现，米曲霉产生的β-半乳糖苷酶即使在45℃高温下贮藏6个月，仍能保存其活力的93.4%。曲霉β-半乳糖苷酶的最适pH 值较低，适用于面包制造时分解面团中的乳糖，有利于酵母发酵，并使制品具有良好的色泽。同时，由于它较为稳定，有很好的耐受性，比酵母β-半乳糖苷酶更适合于固定化酶的制造。目前应用较多的霉菌β-半乳糖苷酶产生菌主要是米曲霉（AsPergillus oryzae) 和黑曲霉（Aspergillus niger）。 2、β-半乳糖苷酶的固定 虽然游离乳糖酶水解乳糖的生产工艺较简单，但是，游离乳糖酶会使牛奶掺入外来蛋白，以及游离酶法成本较高，所以使乳糖酶的应用受到限制。由于固定化酶具有可以反复使用、易与底物分离、能实现连续反应等优点，固定化乳糖酶也有明显的优势，显著地降低了使用成本。因此,人们对乳糖酶的固定化技术进行了大量的研究工作。 2.1乳糖酶的固定的研究现状 国外己使用固定化酶生产功能性乳制品—低乳糖制品，并应用于政府实施的“学生奶计划”之中。我国对于乳搪酶的固定化研究起步较晚，与世界的研究水平还有较大差距。表1为国外固定化酶水解乳糖的现状。 表1 固定化酶水解乳糖