第十四章基因表达的调控.docVIP

第十五章 基因表达的调控 每种生物在生长发育和分化的过程中，以及在对外环境的反应中各种相关基因有条不紊的表达起着至关重要的作用。在原核生物中，一些与代谢有关的酶基因表达的调控主要表现为对生长环境变化的反应和适应。与原核生物相比，真核生物基因表达的调控更为复杂，真核生物基因表达的调控主要是指编码蛋白质的mRNA的形成与使用的调节与控制。基因表达的过程，以真核生物为例，包括以下几个环节：基因的活化——转录——转录后的加工——mRNA转运至细胞质——翻译——翻译后加工，上述各个环节都可以是受调控的点，本章所介绍的主要是转录水平的调控。 第一节 原核生物基因表达的调控 原核生物在对外环境突然变化的反应中，是通过诱导或阻遏合成一些相应的蛋白质来调整与外环境之间的关系。由于原核生物的转录与翻译的过程是偶联的(图15—1)，而且这种过程所经历的时间很短，只需数分钟，同时由于大多数原核生物的mRNA在几分钟内就受到酶的影响而降解，因此就消除了外环境突然变化后所造成的不必要的蛋白质的合成。与真核生物相比，原核生物基因表达的一个特点是快速。 下面分别以大肠埃希菌(E.coli)的乳糖操纵子(1actose operon，属可诱导操纵子)和色氨酸操纵子(triptophan operon,属可阻遏操纵子)为例介绍原核生物转录起始和转录终止的调控。 一、乳糖操纵子 （一）乳糖操纵子的结构和诱导剂 所谓操纵子是指一些成簇排列、相互协同的基因所组成的单位，也称基因表达的协同单位(a coordinated unit of gene expression)。在乳糖操纵子中有Z基因(编码β-半乳糖苷酶，β－galactosidase)，Y基因(编码通透酶，permease)，a基因(编码转乙酰基酶，transacetylase)，上述Z、Y、a是结构基因；P(启动子，promoter)，O(操纵基因，operator)是调控基因；I(编码Lac阻遏物，Lac repressor)不属于乳糖操纵子。(图15—2)。大肠埃希菌能利用乳糖作为碳源，但要将乳糖水解为半乳糖和葡萄糖，催化此水解反应的是β-半乳糖苷酶。由于Z、Y、a以多顺反子(polycistron)形式存在，即三种基因被转录到同一条mRNA上，因此乳糖能同时等量地诱导三种酶的合成。通透酶的作用是使乳糖能透过细菌壁，转乙酰基酶的作用还不清楚。在大肠埃希菌内，真正生理性的诱导剂并非乳糖，而是别位乳糖(allo-lactose)，也是由乳糖经β-半乳糖苷酶(未经诱导少量存在于细菌内)催化形成，并再经β-半乳糖苷酶水解为半乳糖和葡萄糖(图15-3)。 (二)Lac阻遏物的作用 Lac阻遏物是一种具有四级结构的蛋白质，4个亚基相同(分子质量 37000)，都有一个与诱导剂(生理性诱导剂为别位乳糖，实验常用的诱导剂是异丙基硫代半乳糖一IPTG)的结合位点。在没有诱导剂的情况下，Lac阻遏物能快速与操纵基因O结合，从而阻碍结构基因的转录。当有诱导剂与Lac阻遏物结合后，阻遏物的构象就发生变化，导致阻遏物从操纵基因O上解离下来，RNA聚合酶不再受阻碍，能转录结构基因Z、Y、a(图15-4)。Lac阻遏物与操纵基因O结合时所覆盖的区域为28 bp。 (三)CAP与cAMP复合物在乳糖操纵子表达中的作用 大肠埃希菌具有优先利用葡萄糖作为能源的特点。当大肠埃希菌在含有葡萄糖的培养剂中生长时，一些分解代谢酶，如β-半乳糖苷酶、半乳糖激酶、阿拉伯糖异构酶、色氨酸酶等的水平都很低，这种葡萄糖对其他酶的抑制效应称为分解物阻遏作用(catabolite repression)，这种现象与cAMP有关。葡萄糖能降低大肠埃希菌中cAMP的浓度，而加入外源性cAMP能逆转葡萄糖的这种抑制作用。cAMP能刺激多种可诱导的操纵子(inducible operon)，包括乳糖操纵子转录的启动。从这点上来说，cAMP在细菌和哺乳动物中的作用是相同的，都是作为饥饿信号(hunger signal)，但作用机制全然不同，在哺乳动物细胞，cAMP的作用是激活蛋白激酶，再由蛋白激酶磷酸化其他靶蛋白质分子，例如，调控糖原合成和分解的机制；而细菌中cAMP的作用是通过和一种称为分解物基因激活物蛋白(catabolite gene activator protein ，CAP)结合后发挥作用。CAP是一种具有两个相同亚基的蛋白质，每个亚基都具有与DNA结合的结构域和与cAMP结合的结构域。CAP与cAMP结合的复合物才能刺激操纵子结构基因的转录。在乳糖操纵子上CAP与DNA结合的区域正好在启动子P的上游。当没有葡萄糖存在(或低浓度葡萄糖)时，cAMP-CAP复合物结合到相应的DNA序列，并刺激R