细胞膜重要脂质代谢产物对重大疾病病理生理过程的调控.docVIP

项目名称： 细胞膜重要脂质代谢产物对重大疾病病理生理过程的调控 朱毅 北京大学 2010年1月-2014年8月 教育部 一）关键科学问题：?-羥化酶)三大代谢通路的代谢产物，以期明确花生四烯酸的所有活性代谢产物代谢谱的变化，并可望发现新的生物活性物质； （2）运用花生四烯酸三大代谢通路关键合成酶基因的敲除小鼠模型，借助代谢组学手段研究动物组织、血液和尿液中的花生四烯酸代谢产物以及整体代谢组的变化规律，以阐明单一通路阻断对其他通路代谢产物的影响； （3）在细胞和整体动物水平研究在单一代谢途径阻断的情况下，重要病理生理刺激因素对花生四烯酸代谢产物种类和合成水平的影响，以明确花生四烯酸不同代谢产物间的网络调控机制。 2、重要的花生四烯酸代谢产物与相关蛋白的相互作用 （1）利用结构生物学和分子生物学手段明确COX及LOX产物与其相应膜受体结合的结构基础和介导不同信号通路的分子机制。该研究将有助于阐明同一花生四烯酸分子调节不同生理和病生理过程以及不同产物参与同一生理及病生理过程调节的分子基础； （2）研究花生四烯酸代谢产物与代谢性核受体相互作用的机制及其生物学作用，该项研究将可揭示花生四烯酸代谢产物通过核受体调控重要生理、病理生理过程的机制及与重大疾病的关系； （3）发现与重要花生四烯酸代谢产物（包括COX代谢产物前列腺素、前列环素、血栓素；LOX代谢物白三烯、5-HETE和15-HETE和CYP代谢物EETs和(/(-1-HETE） 二、预期目标 （一）总体目标： 本项目整合国内优秀团队， 阐明花生四烯酸代谢通路和代谢产物在几个重大疾病（动脉粥样硬化、高血压、血管再狭窄和心衰）的病理生理过程中的作用靶点和机制； 以重要花生四烯酸代谢产物为探针分子研究它们在重要心血管疾病中的作用，揭示花生四烯酸代谢产物与相关疾病发生关系，为发现具有潜在应用价值的药物靶点奠定基础； 完善和加强代谢组学技术平台以及花生四烯酸代谢相关的转基因小鼠和组织特异性基因敲除小鼠等模式动物平台；运用几种重要的花生四烯酸代谢酶基因和几个重要的代谢物受体转基因或基因敲除动物，完成在非干预状态下和不同干预状态下重要组织器官基因表达谱和蛋白组学研究。 发现10-20个重要的调节或功能蛋白，着重研究和阐明其中5-10种重要蛋白的作用和在调节网络中的作用和位置； 针对花生四烯酸代谢相关的酶、受体、作用靶点，建立专门的基因芯片和蛋白质芯片，用于课题模式动物和细胞基因和蛋白质表达变化的筛选； 在国际主流期刊发表高质量论文60-80 篇，申请国内外专利 10-15 项，申报国家奖励2-4项。 三、研究方案 总体研究方案 （一）学术思路： 以花生四烯酸代谢为中心，以代谢产物和相关蛋白质相互作用和调节为主轴,针对它们在重要病理生理过程中的调节作用，运用现代生物学（组学、结构生物学、生物信息学）和模式动物结合的方法展开研究。在总体研究方案有如下几个层面： 1、在课题的选择上，我们选择花生四烯酸这一分布广泛、其代谢产物复杂且有重要生理病理作用，但作用机制还远未阐明的小分子化合物为研究对象。选用现代生物学方法和转基因/基因敲除等模式动物相结合，横向研究在不同的生理、病理状态下代谢途径，内源性代谢产物的变化及与相关蛋白质相互作用机制； 2、在第一个层面，我们将在三大代谢途径的代谢酶基因和几个重要的花生四烯酸代谢物的受体转基因或基因敲除的细胞模型中，研究基因和代谢产物所致的代谢组和蛋白组变化。结合模式生物学手段研究当一条通路，一个酶活性发生改变时，其他通路和酶的变化，代谢产物的稳态的改变以及整体代谢组改变。以期发现代谢产物与相关酶的相互作用，以及代谢产物在重要生物调控网络中的作用及其机制。 3、在第二个层面，研究花生四烯酸代谢产物与受体及转录因子等相关蛋白的相互作用机制和调控功能。重点研究不同的代谢产物对代谢性核受体重要信号转导途径的调控作用及其空间结构和生物学功能的影响；同时研究与糖、脂代谢调控相关的代谢性核受体和转录因子等对花生四烯酸代谢的调控机制。 4、在第三个层面，研究花生四烯酸三条代谢途径的代谢酶和主要代谢产物在细胞增殖与分化、细胞激活和炎症、糖脂代谢紊乱等重要的病理生理过程中的作用。以心血管系统改变为代表，利用重大疾病如高血压、动脉粥样硬化、糖脂代谢紊乱和心力衰竭等疾病的动物模型和细胞模型，研究发生这些效应的同时蛋白质组和代谢组的变化规律。 （二）总体技术路线 按照上述总体思路，本项目利用多种模式动物研究不同基因缺陷和高表达增强后的表型变化。首先在细胞水平通过高表达或沉默相关基因及直接加入相关代谢物（如PGE2,HETEs,EETs等）验证实验结果并进行机制研究；进而进行基因组、蛋白组学研究和机制研究，明确重要蛋白在整个组学变化中的位置、调节作用