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过氧化氢酶活性的测定 ——碘量法 2003年湖南旱灾 农民不得不下井底 获取饮用水 2003年湖南旱灾 农民不得不下井底 获取饮用水 旱灾后的水稻 1) Intercellular freezing ――细胞间隙结冰 植物对逆境的适应： 植物对逆境的适应： 避逆性（stress avoidance） 耐逆性（stress tolerance） 生物膜 胁迫蛋白 活性氧 渗透调节 脱落酸 逆境下的自由基伤害 PSI 铁氧还蛋白 O2 还原型铁氧还蛋白 O2 NADP+ O2 NADPH O2 叶绿体产生活性氧途径 NADH→ FMN→ Fe-S → UQ → Cytb→→ O2 O2 O2 线粒体呼吸链上的电子泄漏产生活性氧 质膜NADPH氧化酶 NADPH2 + O2 NADP++ O-2（质膜） H2O2和1O2的产生： CHL hr 1O2（叶绿体） 乙醇酸 + O2 乙醛酸+H2O2（ 过氧化物酶体） 生物体内重要的三种氧化酶类，其作用均是清除体内自由基： POD：过氧化物酶 SOD：超氧化物歧化酶 CAT：过氧化氢酶 植物在逆境下或衰老时，由于体内活性氧代谢加强而使H2O2发生累积。H2O2可以直接或间接地氧化细胞内核酸、蛋白质等生物大分子，并使细胞膜遭受损害，从而加速细胞的衰老和解体。 过氧化氢酶可以清除H2O2，是植物体内重要的酶促防御系统之一。因此，植物组织中H2O2含量和过氧化氢酶活性与植物的抗逆性密切相关。 一、实验目的： 1、掌握碘量法测定过氧化氢酶活性的原理和方法； 2、了解过氧化氢酶的作用。 二、实验原理: 植物在逆境下或衰老时，由于体内活性氧代谢加强而使H2O2发生累积。H2O2可进一步生成氢氧自由基（OH˙）。 氢氧自由基（OH˙）是化学性质最活泼的活性氧，可以直接或间接地氧化细胞内核酸，蛋白质等生物大分子，并且有非常高的速度常数，破坏性极强，可使细胞膜遭受损害，加速细胞的衰老和解体。 过氧化氢酶(catalase；CAT)可以清除H2O2、分解氢氧自由基，保护机体细胞稳定的内环境及细胞的正常生活，因此CAT是植物体内重要的酶促防御系统之一，其活性高低与植物的抗逆性密切相关。 二、实验原理: CAT活性大小以一定时间内分解的H2O2量来表示： 在一定条件下，CAT能把H2O2分解为H2O和O2。当CAT与H2O2反应一定时间(t)后，再用碘量法测定未分解的H2O2，以钼酸铵作催化剂，H2O2与KI反应，释放出游离碘，然后用硫代硫酸钠滴定碘，反应式为： H2O2（余）+2KI+H2SO4----→I2+K2SO4+2H2O I2 +2Na2S2O3 --→2NaI+Na2S4O6（连二硫酸钠） 用硫代硫酸钠分别滴定空白液(可求出总的H2O2量)和反应液(可求出未分解的H2O2量)，再根据二者滴定值之差求出分解的H2O2量。 三、实验材料、仪器和试剂： 1、实验材料：三叶草、盐胁迫、干旱胁迫、低温 2、仪器： (1) 滴定管 (2)研钵 (3) 容量瓶 (4)移液管 (5)三角瓶(100ml) 3、试剂： （1）0.05M H2O2 （2）0.2M Na2S2O