实验三通课-2013-4.pptVIP

操作内容 1.观察菌落特征（SS平板）。 2.将可疑菌落接种于双糖铁培养基上（穿刺+斜 面），37℃培养24h，观察结果。 1支/台 3.玻片凝集试验。 1片/人 4.取可疑菌落做革兰染色。 1片/人 注意：按照上面的顺序依次进行实验。 药 敏 试 验 目的： 1.掌握：纸片扩散法药敏试验的原理及结果判定； 2.了解：药敏试验的操作方法和意义。 原理： 含有定量抗菌药物的纸片贴在已接种测试菌的琼脂平板上，纸片中所含的药物吸取琼脂中的水分溶解后便不断地向纸片周围区域扩散，形成递减的浓度梯度。在纸片周围抑菌浓度范围内的细菌的生长被抑制，形成透明的抑菌圈。抑菌圈的大小反映测试菌对测定药物的敏感程度。 主要材料： 1.普通琼脂平板 2.含抗生素的滤纸片： 青霉素 氯霉素 链霉素 庆大霉素 方法： 标记分区 密涂接种 贴片 培养 结果观察 1.标记分区 底部观 2.密涂接种 分三次接种，每次取一环。第一次密涂接种后旋转60度二次密涂接种，然后同方向旋转60度后再次密涂接种。 顶部观 3.贴片 顶部观 4.培养 37℃温箱， 倒置培养18-24h。 青霉素 链霉素 庆大霉素 氯霉素 5.结果 抑菌圈直径 抑菌圈 6.注意事项 接种时均匀密涂。 贴片时，用无菌镊子轻轻触压药物纸片使之与培养基充分接触。 镊取药物纸片时一旦掉到培养基表面，则继续保持其位置，切勿镊起重新放置，以防不同抗生素交叉影响。 实验报告 肠道致病菌的分离培养和鉴定。 （分离培养的方法，鉴定的步骤、结果 及鉴定依据） 下周实验内容 1.内毒素的检测 2.病毒的接种 3.真菌菌落的观察 4.考试 1.请将实验后的玻片放入前面的消毒缸中。 2.离开实验室之前请用肥皂洗手。 * * 一、物理因素对细菌的影响 (1.5学时) 1.高压蒸汽灭菌法（两个实验室一台） 2.紫外线杀菌实验（普通平板：4个） 二、肠道致病菌的鉴定(2.5学时) 1.双糖铁培养基：8个 2.玻片凝集实验：每人一张 3.革兰染色：每人一张 三、药敏实验(1学时) 示教 介绍及展示示教平板 第三次实验课内容（3个） 内 容 提 要 三、药敏试验 二、肠道致病菌的鉴定 一、物理因素对细菌的影响 一、物理因素对细菌的影响 1.高压蒸汽灭菌法 2.紫外线对细菌的影响 1.高压蒸汽灭菌法 完全杀灭细菌的繁殖体和芽胞 压力：103.4KPa 温度: 121.3℃ 时间：15-20min （43页） 使用方法： ①加水至锅内达规定的水平面，放入欲灭菌物品，以两两对称的方式同时旋紧相对的两个螺旋，使锅盖均匀密闭。 ②用电炉加热，同时打开排气阀门，使冷空气逸出。待冷空气全部排出后，关闭排气阀。 ③继续加热注视压力表，器内压力又逐渐升高，直到压力表指在所需数字即调节热源，维持15～20min． ④停止加热，待压力自行下降至零时方可徐徐开放排气阀，排尽余气，打开锅盖，取出灭菌物品。 全自动高压蒸汽灭菌锅 注意事项： 锅内物品不宜过紧。 注意排出冷气，否则气压表虽已达15磅，温度达不到121.3℃，不能保证灭菌效果。 灭菌后排气不能过急，以免容器内液体外溢或引起破裂。 不耐高热高压之物品，不能用此法。 紫外线杀菌作用强，而穿透能力弱。 紫外线中波长265-266nm的杀菌作用最强。 杀菌机制：引起DNA链上相邻的胸腺嘧啶形成二聚体，从而干扰DNA的复制和转录，导致细菌死亡。 2.紫外线对细菌的影响 方法:（每个实验室4个培养皿） 取一个平皿，用密涂法将细菌涂布于培养皿中，取一无菌滤纸片将平皿部分遮盖（或打开一半平皿盖），置于紫外灯下照射30分钟，将纸片拿开，然后盖好平皿，37℃倒置培养24h后取出观察结果。 滤纸片用后需要用火烧掉 密涂接种 分三次接种，每次取一环。第一次密涂接种后旋转60度二次密涂接种，然后同方向旋转60度后再次密涂接种。 二、肠道致病菌的鉴定 病原菌的检验程序 增菌培养 革兰染色 分离培养 接种琼脂斜面纯培养 采集标本 生化试验 血清学试验 动物试验 分析鉴定 革兰染色 观察菌落特征 一、糖发酵试验 [原理] 根据细菌分解利用糖能力的差异表现出是否产酸产气作为鉴定菌种的依据。是否产酸，可在糖发酵培养基中加入指示剂溴甲酚紫（即B.C.P指示剂，其pH在5.2以下呈黄色，pH在6.8以上呈紫色），经培养后根据指示剂的颜色变化来判断。是否产气