气相色谱法分离条件的选择1.pptVIP

内标对比法 内标校正曲线法的截距近似为零，可用内标对比法(已知浓度试样对照法)定量： 方法优点： 不必测出校正因子，消除了某些操作条件的影响，不需严格准确体积进样。 方法缺点： 要进行两次色谱操作，必须保证两次测定的校正因子相同，否则会导致测定误差 三、应用及实例 气相色谱法在药物分析中的应用很广泛，包括药物的含量测定、杂质检查、有机溶剂的残留量、中药成分研究、制剂分析、治疗药物监测和药物代谢研究等。 1.药物有机溶剂残留量测定 药物中有机溶剂残留量测定在药典中可用不同的方法表述：一为有机溶剂残留量限度列在质量标准品种项下，如秋水仙碱中的氯仿和醋酸乙酯；二为药典中列出一个应限制残留溶剂的总表。 表 有机溶剂残留量限量(1×10-6) 有机溶剂 中国药典 美国药典 欧洲药典 苯 2 2 100 氯仿 60 60 50 二氧六环 380 380 100 二氯甲烷 600 600 500 吡啶 200 100 甲苯 890 环氧乙烷 10 三氯乙烯 80 100 乙腈 50 2.药品的含量测定 例 维生素E含量测定(中国药典2000年版二部) 色谱条件与系统适应性试验：以硅酮(OV-17)为固定液，涂布浓度为2%，柱温为265℃。理论塔板数按维生素E峰计算应不低于500，维生素E峰与内标峰的分离度应大于2。 (1) 校正因子测定 取正三十二烷适量，加正己烷溶解并稀释成每1ml中含1.0mg 的溶液，摇匀，作为内标溶液。另取维生素E对照品约20mg,精密称定，置棕色具塞锥形瓶中，精密加入内标溶液10ml，密塞，振摇使溶解，取1～3μl注入气相色谱仪，测定，计算，即得。 (2)维生素E片、注射液、胶丸及粉剂均用上述气相色谱法测定。 3.有关物质检查 气相色谱法除了用于药品含量测定外，还可用于有关物质测定，如克罗米通顺式异构体的测定，采用PEG-20M，涂布厚度为0.25μm,30m长，柱温180℃，规定含顺式异构体不得超过顺、反式异构体之和的15%。 * 加图19-7，p403 * 加图19-9，p407。 2.载气的选择 常用的载气：N2,H2,He. 根据Golay曲线，多用氢气作载气。 3.液膜厚度 液膜厚度增加会使塔板高度增加，柱效下降。 为了快速分析，常用小柱内径和薄液膜柱，为了增大柱容量，采用大口径和厚液膜柱。 三、毛细管气相色谱结构流程 进样部分有用载气分流放空的控制流路和为检测器提供柱后尾吹气的流路系统 (一)进样系统 毛细管柱与填充柱的比较 毛细管柱 填充柱 内径 1mm 4～6mm 流速 1ml/min 30ml/min 柱外死体积 影响峰展宽 不影响峰展宽 由于死体积影响毛细管柱的峰展宽，柱后要用尾吹流路系统，进样用分流装置，采用分流进样方式。 1.分流进样 分流进样：进样后，气化室中载气流量较大，气化后，将混合物中较小的部分送进柱子，大部分放空。 如气化室总流速100ml/min, 柱流速1ml/min, 进样时间为1/100 min。 作用： (1)快速进样，起始谱带窄。 (2)控制样品进入色谱柱的量，保证毛细管柱不超载。 2.分流进样器和分流比 分流进样器： 使用玻璃内插套管作为 进样器的气化室，分流 进样使用2～4mm的玻璃 套管，同时打开分流进 样阀。 分流比：放空的试样量与进入毛细管柱的试样量之比。一般在50：1到500：1之间调节。 分流后，柱后流出的试样组分量少、流速慢。 解决方法：灵敏度高的氢焰检测器，采用尾吹技术。 3.线性分流 样品组分经过分