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米根霉生产平台化学品的代谢工程 摘要 米根霉属于接合菌的丝状真菌。它能够持久的产生平台化学品L -（+）- 乳酸，延胡索酸和乙醇。在糖酵解过程中，所有可发酵的碳源被代谢为丙酮酸并随后分布到形成这些产品的途径中。这些平台的形式化学品的生产，在一个广泛的碳源范围内，是高收率的。L - （+）- 乳酸和乙醇的理论产率超过85％，延胡索酸的在65％以上。参与生产这些化合物代谢途径的研究和优化，需要发达的代谢工程技术和这个有机体基因构成的知识。本文着重介绍了目前米根霉的代谢工程技术及其主要发酵产物代谢途径的应用。 关键字 米根霉、代谢工程、代谢途径、转化、外源基因表达 介绍 估计在未来的几十年里，煤炭，石油和天然气等化石资源耗尽或不能大量使用。当前不断增加的成本,产油地区的地缘政治不稳定,可持续发展问题都导致了这个问题。发展替代能源取代化石资源的原料，这样就形成了强烈的契机。已经出现地热、水、风、太阳能、核能形式的能源发电。唯一可行的替代运输燃料和平台形式的化学物质的生成，是生物质产品。借助微生物的发酵过程，生物质可以转换成生物质燃料和平台化学品。为了能够与工艺基础上的石油化工原料竞争，这些微生物应该表现出较高的产品产量（克每克），生产力（克每升每小时），和产品的效价（克每升）。其他的先决条件是能够使用许多碳源,抵抗生物质预处理释放的发酵抑制剂,能够在没有复杂的生长因子中生长等。 米根霉是一种能够在高含量的生物质衍生糖中生产乙醇，L-（+） - 乳酸，延胡索酸的真菌。这些发酵产物的市场大，表明了这种微生物生产平台化学潜能。在2000年，全球生产的乙醇为17.25十亿公升，而且到2009增加的量超过740亿升。到2020年，这个市场预计将增加超过1250亿升。全球市场的L - （+）-乳酸在2000年超过100,000吨，，2012年预计将增加259000吨。L-（+） - 乳酸，目前主要用作食品或饲料酸化剂，但它也可以被用于在快速市场中的的可再生塑料，溶剂，或含氧化合物和动物饲料。延胡索酸的市场规模较小，但2007年估计量仍有90,000吨。这个市场也有望在未来几年内增加。延胡索酸目前在食品工业中直接作为pH调节剂，防腐剂，增香剂使用。由于它的结构，它可作聚酯和醇酸树脂的产物离子。除了这些平台化学品，米根霉也可用于各种各样商业有关酶的生产。Ghosh和Ray最近都在生物技术工艺中应用米根霉。 代谢工程技的使用，使米根霉产物的形成得到优化，通过同源基因过度表达，或淘汰现有相互竞争的途径，使异源基因引入化学品的生产。本文综述了国家当前最先进的分子生物学技术用于米根霉通路工程以及如何用它们来研究和提高其主发酵产品的产量。 米根霉有机体 米根霉是丝状真菌，是接合菌纲的毛霉菌目。根霉属的黑根霉的描述在1820年首次建立，以形成发酵产物而闻名，如乙醇，L-（+） - 乳酸，延胡索酸，以及在一定程度的L-（+）-苹果酸。曲霉菌，镰刀菌，和青霉是有生产延胡索酸的能力。米根霉在亚洲常用于食品发酵，生产酒精饮料， 鸭脚稗，或豆豉，通常视为安全菌株。尽管如此，米根霉也可能成为人类病原体，毛霉真菌病感染后具有较高的患病率。大多数毛霉菌感染病例有潜在的疾病，如血清铁水平升高，外伤，或免疫系统削弱。 米根霉是在自然界普遍存在，并且发现也存在在腐烂的有机材料上。它能够在各种各样的碳源上生长，例如，甘油，乙醇，乳酸，葡萄糖，甘露糖，果糖，蔗糖，木糖，纤维二糖，脂肪酸，和油。所有提及的糖都证明是L -（+）-乳酸或延胡索酸生产离子的一种底物。此外，米根霉具有分解淀粉，木聚糖，果胶，纤维素的能力，能够转化农业残留物中的聚合物。它能够在很宽的温度范围内（不超过40℃）和pH值范围内（从4至9）生长良好，这表明了它的强大性能和广泛适应潜力。 米根霉生产的化学物质 第一个提及米根霉有产生有机酸的能力是在Saito1911年用华根霉生产乳酸和Ehlich用黑曲霉主要生产延胡索酸及乳酸，琥珀酸，和苹果酸的报道中。Takahashi和他的同事的研究表明，还有其他的产品形成，如乙醇。Ward等人，利用米根霉在葡萄糖中生产L - （+） - 乳酸，最终产率为0.62克/克。从那时起，米根霉已被广泛的用于生产有机酸，乙醇，酶，和其他市售产品。最近Ghosh和Ray做了这些研究。 正如前面提到的，米根霉能够高效地生产发酵终产物。有氧呼吸L-（+）- 乳酸生产的最大理论产率是2摩尔的L - （+） - 乳酸每摩尔的D-葡萄糖的消耗，即1.0克L - （+） - 乳酸每克D-葡萄糖。延胡索酸的最大理论产率是2摩尔延胡索酸每摩尔的D-葡萄糖的消耗，即1.3克延胡索酸每克D-葡萄糖。L-（+）-乳酸的最高产量为0.88克/克，延胡索酸的最高产量是0.86克/克，主要副产物为乙醇。这些还表明米根霉能够