第十三章免疫细胞分离与功能检测.pptVIP

第十三章  免疫细胞分离与功能检测及应用 目的要求 掌握：Ficoll-hypaque分层液分离PBMC的原理、方法，淋巴细胞亚群分离的原理、方法及应用，T细胞增殖试验的方法，B细胞的数量及功能的检测； 熟悉：T细胞功能的体内试验，T细胞介导的细胞毒检测的方法； 了解：淋巴细胞的纯化与亚群分离的方法、吞噬细胞的分离方法、溶血空斑试验。 第一节 免疫细胞的分离 免疫细胞的分离流程 PBMC包括：淋巴细胞、单核细胞 各种血细胞比重不同,利用密度梯度离心进行分离 常用分层液：ficoll－hypaque，percoll 　　 Ficoll分离液法是一种单次差速密度梯度离心的分离法，主要用于分离外周血中的单个核细胞。 Ficoll分层液：密度1.077±0.001 离心：密度梯度离心 分离：各类细胞按其相应密度重新分布　　 (三)磁铁吸引法 利用单核细胞具有吞噬的特性，在悬液中加入羰基铁颗粒，待单核细胞吞噬铁颗粒后，用磁铁将细胞吸至管底，上层液中含较纯的淋巴细胞群。 三、T、B细胞和T细胞亚群的分离 免疫磁珠分离法 流式细胞术分离法 其他方法 第二节 淋巴细胞表面标志的检测及亚群分类 二、B细胞表面标志及亚群亚群 第三节 抗原提呈细胞表面标志 一、T细胞功能检测 形态学检查法 3H-TdR掺入法 MTT比色法 原理： 原理:用刺激剂体外激活淋巴细胞，用蛋白