2.2《土壤中尿素的细菌的分离与计数》范例.pptVIP

15.0g 琼脂 1.0g 尿素 10.0g 葡萄糖 0.2g MgSO4`7H2O 2.1g NaH2PO4 1.4g KH2PO4 3、土壤中分解尿素的细菌的分离与计数所需培养基： ①从物理性质看此培养基属于哪类？ 固体培养基 ②在此培养基中哪些作为碳源、氮源？ 碳源：葡萄糖 氮源：尿素 该培养基的配方中尿素是唯一的氮源，只有能够合成脲酶的微生物才能利用尿素，才能在该培养基上生长。其他的微生物由于缺乏脲酶不能分解尿素，从而缺乏氮源不能在培养基上生长繁殖，所以用此培养基就能够选择出分解尿素的微生物。 5、培养基选择分解尿素的微生物的原理 选择培养基： 在微生物学中，允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基。 培养基的氮源为尿素，只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素，以尿素作为氮源。缺乏脲酶的微生物由于不能分解尿素，缺乏氮源而不能生长发育繁殖，而受到抑制，所以用此培养基就能够选择出分解尿素的微生物。 3、培养基选择分解尿素的微生物的原理 以下选择培养基可以分离哪些微生物？ 加入青霉素的培养基 杀死细菌、放线菌，分离酵母菌、霉菌等真菌 加入高浓度食盐的培养基 杀死多种微生物，分离出金黄色葡萄球菌 不加氮源的无氮培养基 分离出自生固氮菌（非固氮菌因缺少氮源被淘汰） 不加含碳有机物的无碳培养基 分离出自养型微生物（异养微生物因缺少有机物被淘汰） 加入抗生素的培养基 利用抗生素抗性基因作标记基因，选择分离出导入目的基因的工程菌 怎样证明此培养基具有选择性呢？ 以尿素为 唯一氮源 的培养基 牛肉膏 蛋白胨 培养基 ?是 分离 尿素 细菌 判断该 培养基 有无选 择性 实验组 对照组 培养基类型 是否 接种 ?目的 ?结果 只生长尿素细菌 生长多种微生物 是 （二）统计菌落数目 显微镜直接计数法 稀释涂布平板法（活菌计数法） 1、显微镜直接计数法 1mm 每一个大方格边长为 1mm ，则每一大方格的面积为1mm2，盖上盖玻片后，载玻片与盖玻片之间的高度为0.1mm，所以计数室的容积为0.1mm3。　　 1mm 下面以一个大方格有25个中方格的计数板为例进行计算：设五个中方格中总菌数为A，菌液稀释倍数为B，那么，一个大方格中的总菌数是多少? 1ml菌液中的总菌数?(1ml=1cm3=1000mm3）　　 5AB×104 5A 缺点： 不能区分死菌与活菌 1、显微镜直接计数： 利用血球计数板，在显微镜下计算一定容积里样品中微生物的数量。 不能区分死菌与活菌； 不适于对运动细菌的计数； 需要相对高的细菌浓度； 个体小的细菌在显微镜下难以观察； 缺点 2、统计菌落数目——稀释涂布平板法 平板菌落数统计注意事项 1、几个菌落粘连一起，只要肉眼能区分，就算几个； 2、不管菌落大小，只要肉眼看得见，就应该计数； 【例1】某同学在稀释倍数为106的培养基上测得平板上的菌落数的平均值为234，那么每毫升样品中菌落数是（涂布平板时所用稀释液的体积为0.1 mL） A.2.34×108　　　　　　B.2.34×109 C.234　　　　　　　　　D.23.4 思考1：如何根据平板上的菌落数推测出每mL样品中的菌株数？ 【解析】选B。稀释倍数为106，0.1 mL稀释液的菌落数的平均值为234，则每毫升样品中菌落数就为234/0.1×106=2.34×109。 每mL样品中的菌株数=（C÷V）×M C：某一稀释度下平板上生长的平均菌落数 V：涂布平板时所用的稀释液的体积 M：稀释倍数 思考2：为什么测平板上的菌落数可以推测样品中的活菌的数目？ 当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约有多少活菌。 为了保证结果准确，一般选用菌落数在30~300的平板进行计数。 思考3：统计的菌落数往往比活菌的实际数目高还是低，为什么？ 低。因为当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落。因此，统计结果一般用菌落数而不是活菌数来表示。 2、间接计数法（活菌计数法） ⑴原理：在稀释度足够高时，微生物在固体培养基上所形成的一个菌落是由一个单细胞繁殖而成的，即一个菌落代表原先的一个单细胞。 ⑵常用方法：稀释涂布平板法。 每克样品中的菌落数＝(C÷V)×M C代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，V代表涂布平板时所用的稀释液的体积(ml)，M代表稀释倍数。 两位同学用稀释涂布平板法测定同一土壤样品中的细菌数。从对应稀释倍数为106的培养基中，得到以下两种统计结果。