输血前配合性试验技术课件.pptVIP

输血前配合性试验技术 主要内容 一、ABO和Rh血型鉴定 二、抗体筛选和鉴定 三、交叉配血试验 四、抗人球蛋白试验 五、血小板输注前的抗体检测及配合试验 六、血浆输注前配合试验 输血风险 血型定型是基础 目的：准确定型，选择相容血液 意义：输血安全、有效 一、ABO和Rh血型鉴定 1.ABO定型 最适的反应温度为4℃，但在室温反应良好，常规的ABO定型试验仅在室温进行。 红细胞常规ABO定性 血型 正定型 反定型 抗 A 抗 B Ac Bc Oc A + - - + - B - + + - - O - - + + - AB + + - - - 鉴定方法介绍 1）玻片法、试管法(经典方法) 玻片法和试管法的实验原理基本相同，二者的共同点是操作简便，玻片法只做正定型,试管法进行ABO血型鉴定的正定型和反定型。 缺点：操作不易自动化、批量化、结果不易保存 2）微柱凝胶法 过滤介质为颗粒直径26-103 nm的葡聚糖100凝胶，凝胶间缝隙只允许游离红细胞通过，与抗 体反应的红细胞不能通过。 工作程序和结果的判读易于标准化，自动化。该实验方法还具有所需标本少、结果准确、抗干扰能力强、溶血和脂血影响少、重复性好等优点，有利于实验室的质量控制，提高工作效率。 微柱凝胶法结果 3）PCR血型基因分型 包括PCR-SSP(PCR-序列特异性引物)技术、 PCR-SSO(PCR-序列特异性寡核苷酶探针)技术、PCR-SSCP(PCR-单链构象多态性)技术、基因芯片等。 基因分型技术的应用： ①疑难血型鉴定：ABO 血型亚型的鉴定、血型抗原减弱个体的血型鉴定、抗体消失的血型鉴定、获得性B的鉴定等 ②直接抗人球蛋白试验阳性的患者血型鉴定 ③亲子鉴定及法医应用等 4) ABO血型的流式细胞术检测 方法和原理是用荧光素标记人源抗-A、抗-B 单克隆抗体，与待测标本中的红细胞反应,然后用流式细胞术检测待测标本中细胞与抗-A、抗-B 单克隆抗体的结合情况 成本高、操作复杂,非常规方法 利用流式细胞术对孕妇血流中微量的胎儿红细胞进行检测可以实现非侵入性胎儿血型鉴定 抗原抗体比例：一般认为增加抗体量能提高检测敏感性，极少有显著性抗体过量而抑制凝集反应者（前带现象）。 2滴血清+1滴 2%～5%红细胞 必要时血清增加到10～20滴 前带现象：一种抗原-抗体反应的现象。以定量抗原检测抗体，若抗体过剩，可使所形成的免疫复合物反而减少，而不出现凝集。 盐水试验多采用立即离心法,正确的操作是红细胞悬液加到血清后立即离心并观察结果。反应时间过长而延误立即离心的时间对ABO血型系统的抗体检出影响较大。 ①如果在室温放置2分钟后离心,可能使凝集减弱,并伴有溶血现象。 ②如果在室温放置5分钟后离心,原有的凝集可能消失,并有溶血。 常规定型试剂要求 第一、高度特异，只能与相应的红细胞抗原发生凝集 第二、抗A血清效价在1：128以上，抗B血清效价在1：64以上 第三、亲和力要求抗体和抗原发生的速度应在两者相加后15秒内出现凝集，其强度为3分钟时凝块不小于1mm2 第四，冷凝集素效价在1：4以下 ABO定型试验中的常见问题 1）技术和管理错误：标本、试剂、 器材原因；离心力过度或不足；阳性反应产生溶血现象未能识别；漏加试剂、结果记录和判断错误；细胞与血清间比例不适当。 2）血清异常：Wharton胶或血清蛋白引起缗 钱状形成，影响反定型结果。 3）红细胞致敏：受免疫球蛋白致敏的红细胞，在含高蛋白介质的试剂中，可发生凝集。 4）异常基因型：ABO亚型的检查中，A、B抗 原可能为弱抗原，难以检出。 5）近期输血：试验前输入ABO血型不一致的红细胞，使血液标本成为混合血型的红细胞悬液，定型时显示“混合外观凝集”现象。 6）嵌合体血型（开米拉，chimerism）:这种血型者体内有两类红细胞群体，定型时可以出现“混合外观凝集”现象。 7）疾病因素导致抗原减弱：某些白血病患者和难治性贫血患者等。 8）红细胞多凝集现象：红细胞因遗传或获得性的表面异常，发生多凝集现象。 9）获得性B：由于革兰阴性杆菌的作用，红细