酶的基本性质实验.pptVIP

实验六 酶的基本性质实验—— 底物专一性、激活剂和抑制剂、最适温度 1.相对专一性 一种酶能够催化一类具有相同化学键或基团的物质进行某种类型的反应。 2.绝对专一性： 有些酶对底物的要求非常严格只作用于一种底物，而不作用于任何其他物质。如脲酶只能催化尿素进行水解而生成二氧化碳和氨。如麦芽糖酶只作用于麦芽糖而不作用其它双糖，淀粉酶只作用于淀粉，而不作用于纤维素。 3.立体异构专一性 有些酶只有作用于底物的立体异构物中的一种，而对另一种则全无作用。如酵母中的糖酶类只作用于D-型糖而不能作用于L-型的糖。 本实验以唾液淀粉酶、蔗糖酶对淀粉、蔗糖水解反应的催化作用来观察酶的专一性。采用Benedict试剂检测反应产物。 Benedict试剂是碱性硫酸铜溶液，具有一定的氧化能力，能与还原性糖 的半缩醛羟基发生氧化还原反应，生成砖红色氧化亚铜沉淀。 Na2CO3+ 2H2O 2NaOH + H2CO3 CuSO4+ 2NaOH Cu(OH)2+ Na2SO4 还原糖(—CHO or —C=O)+ 2Cu(OH)2 Cu2O + 2H2O + 糖的氧化产物 三、实验材料与试剂 1、实验材料 ⑴ 蔗糖酶液(样品Ⅳ）; ⑵ 新鲜唾液（含唾液淀粉酶）； 2、实验试剂 ⑴ 蔗糖酶液 蔗糖酶液(样品Ⅳ），使用浓度可参考“实验四 蔗糖酶的酶活力测定”实验的情况来选择酶的稀释倍数（加蒸馏水稀释），备用； ⑵ 唾液淀粉酶液（学生自制） 取0.5mL唾液至50ml量筒中，用蒸馏水（稀释）到50ml，用棉花过滤备用。唾液稀倍数因人而异，可稀释50～400倍，甚至更高； ⑶ 5%蔗糖（A.R.）溶液； ⑷ 0.5%淀粉溶液（含0.3%NaCl）； ⑸ Benedict试剂 ； 四、实验器材与仪器 1.漏斗， 2.脱脂棉花； 3.恒温水浴（37℃，100℃）； 4.量筒； 5.试管及试管架； 6.烧杯； 7.吸量管。 五、实验操作方法和步骤 ㈠ 检查试剂 取3支试管，按下表操作： ㈡淀粉酶的专一性取三支试管，按下表操作： 注： 可增加一组蔗糖酶液(样品Ⅳ） 经100℃加热3min处理后的样品对照组。 ㈢蔗糖酶的专一性 取三支试管，按下表操作： Ⅱ. 影响酶活性的因素——激活剂和抑制剂 一、实验目的和要求 1. 了解激活剂和抑制剂对酶促反应速度的影响。 2. 学习检定激活剂和抑制剂影响酶促反应速度的原理和方法。 二、实验基本原理 在酶促反应过程中，酶的活性常受某些物质的影响，有些物质能使酶的活性增加，称为激活剂；某些物质它们并不引起酶蛋白变性，但能使酶分子上的某些必需基团（主要是指酶活性中心上的一些基团）发生变化，因而引起酶活力下降，甚至丧失，致使酶反应速度降低，称为酶的抑制剂。 酶的激活剂种类： 1、一些简单的无机离子，如Mg2+、Cl-等； 2、一些中等大小的有机分子，如抗坏血酸等也是激活剂，它们对某些含巯基的酶具有激活作用； 3、有些酶的催化作用易受某些抑制剂的影响，因而能除去抑制剂的物质也可称为激活剂，如EDTA能除去重金属，因而能解除重金属对酶的抑制作用。 4、具有蛋白质性质的大分子物质，这些激活剂是指可对某些无活性的酶原起作用的酶。 酶的抑制剂有许多种： 如重金属离子（Ag+、Hg2+、Pb2＋、Cu2＋等）、CO、氯化物、H2S、砷化物、氟化物、生物碱、有机磷农药等都是抑制剂。 少量的激活剂或抑制剂就能影响酶的活性，而且常具有特异性。值得注意的是激活剂和抑制剂不是绝对的，各种激活剂对酶的作用是不同的。 本实验利用淀粉被水解的不同阶段产物与碘有不同颜色反应，定性观察唾液淀粉酶在酶促反应中激活或抑制现象。淀粉经酶促水解为葡萄糖的不同阶段的产物与碘作用的颜色反应如下： 淀粉 紫色糊精 红色糊精 无色糊精 麦芽糖 葡萄糖 I2 ? 显蓝色 显紫色 显红色 不显色 不显色 不显色 （ 碘色） （碘色） （碘色） 本实验中，Cl-为唾液淀粉酶的激活剂； Cu2+为唾液淀粉酶的抑