流式细胞术的临床应用.pptVIP

* Fluorescence FALS Sensor Fluorescence detector * PMT PMT PMT PMT Dichroic Filters Bandpass Filters Example Channel Layout for Laser-based Flow Cytometry Laser 1 2 3 4 Flow cell * 台式机通常配有两根激光器：第一根激光器波长为488nm。第二根为波长635nm的红二极管固态激光器。 * 数据分析  * Immunophenotyping CD2 CD4 * 设门 通过设门的方法可以定义细胞亚群的区域。如：血样本是混合细胞群，如果想单独分析淋巴球细胞，可根据FSC或细胞大小，在FSC，SSC的散点图中设门，其数据结果只反映淋巴细胞亚群的荧光特性。 * * 直方图可直观单个参数的细胞数量。阴性对照用于决定直方图中单参数的左右边界。左图中M1为阴性对照峰。右图中M2为CD3 FITC阳性峰。 * * 统计结果表明，整个事件共记录了6000个细胞，门内淋巴细胞2891个。其中M1（阴性）细胞619个，M2（CD3阳性）细胞2272个细胞。淋巴细胞亚群CD3阳性百分含量的统计结果为：M2：2272/2891=78.59%。 * 二维点图以双参数显示结果，每个点表示一个或多个细胞。图为阴性对照图，用于设定阴性对照边界，全图划分为四个象限，以区分阴性细胞、单阳性细胞以及双阳性细胞。左下象限（LL）为双阴性细胞，左上象限（UL）为Y轴阳性细胞（CD19 PE），右下象限（LR）为X轴阳性细胞（CD3 FITC），右上象限 （UR）为双阳性细胞（CD19+/CD3+）。 * 如图5-7所示，淋巴细胞亚群双阳性细胞（CD19+/CD3+）的百分含量为：296/2839=10.43%。 * 分 选 * 488 nm laser + - Charged Plates Single cells sorted into test tubes FALS Sensor Fluorescence detector Purdue University Cytometry Laboratories * 流式细胞术的临床应用 * 1.检测淋巴细胞亚群，监测细胞免疫状态 2.白血病/淋巴瘤免疫分型 3.HLA组织配型及HLA与某些疾病的关系 4.干祖细胞的定量及成分分析. 5.其它:血小板PAIg：粘附分子;TCR多态性检测; 肿瘤癌基因及 抑癌基因蛋白产物的检测;细胞内酶;耐药蛋 白的分析等等。 临床常见应用 * HLA-B27检测 外周血HLAB27的表达及其表达程度与强直性脊柱炎的发生有很大程度的相关性. 循环血中活化血小板（CD62P、CD63）： 糖尿病伴微血管病变、冠心病、高血压病、高脂血症、脑血栓形成、短暂性脑缺血发作、脑动脉硬化患者活化血小板百分率和绝对值显著高于正常人。而糖尿病无微血管病变、周围血管病变以及深静脉血栓形成患者活化血小板水平与正常人无显著差异。PTCA后24小时发展成急性血管闭塞或高度再狭窄的患者活化血小板CD62p、CD63增多，可以用于预测PTCA后急性缺血再发作的危险性。 * 微转移肿瘤细胞 灵敏度:10-7 * 细胞周期分析:在细胞周期(G0，G1，S，G2 ，M)的各个时期，DNA的含量随各时相呈现出周期性的变化。通过核酸染料标记DNA，并由流式细胞仪进行分析，可以得到细胞各个时期的分布状态，计算出G0/G1%，S%及G2/M%。了解细胞的周期分布及细胞的增殖活性。也可利用细胞周期蛋白（CYCLIN）、Ki67、核增殖抗原（PCNA）等，对细胞周期进行精确的分期：G0、G1、S、G2、M. DNA含量及细胞周期分析 * G2 M G0 G1 s 0 200 400 600 800 1000 G0 G1 s G2 M DNA Analysis DNA content Count 2N 4N Normal Cell Cycle * 0 200 400 600 800 1000 2N 4N Counts G0/G1 G2/M S 异倍体 PI 荧光强度(DNA含量) 流式DNA周期示意图 * 定量分析 1.检测细胞特异性标记物：FCM不但可以定性分析标记物，而且可以进行定量。用标记已知数量的荧光素分子的标准微球作参照，可以计算出每个细胞抗原定簇的个数。 2.CD4绝对计数 3.CD34绝对计数 4.血小板绝对计数 5.可溶性物质(如细胞因子)的高通量定量检测 * 血小板计数新标准(双平台法) R = 红细胞数R3/血