第二十五章霉形体（Mycoplasmas）.docVIP

霉形体（Mycoplasmas） 概述 霉形体又称支原体，是一类没有细胞壁的原核细胞型微生物。细胞膜含固醇，能通过0.45um滤菌器；但呈二分裂繁殖，含DNA与RNA。霉形体是目前所知能在无生命培养基中繁殖的最小微生物。过去曾称为类胸膜肺炎微生物(pleuropneumonia-likeorganism，PPLO)，由于它们能形成有分枝的长丝，故称之为支原体。霉形体因其没有细胞壁故归属于柔膜体纲（Mollicute)的支原体目(Mycoplasmatales)。下分3个科：支原体科(Mycoplasmataceae)；无胆甾原体科(Acholeplasma-taceae)，生长时不需要外源性胆固醇；螺原体科(Spiroplasmataceae)，生长至一定阶段呈螺形。在支原体科中又分支原体(Mycoplasma)和脲原体(Ureaplama)2个属。支原体属现知有64个种，而脲原体属仅2个种。 一、历史 1898年法国人Nocard Roux 从患有胸膜肺炎的病牛中分离到一种病原体。既不同于细菌也不同于病毒，将该病原体称为胸膜肺炎微生物（Pleuropneumonia organism，ppo）。后来许多学者从广泛的宿种分离到相似的微生物，尽管它们不引起胸膜肺炎病变，但在形态、培养特性等方面均与ppo极相似。因此，就统称为类胸膜肺炎微生物（Pleuropnemonia Like organisms，PPLO）。 1956．Edward 和Freundt 提出“霉形体”。 目前，在医学上译作“支原体”。在兽医学上，译为“霉形体”。 二、形态及染色 霉形体是原核细胞生物中最小的介于细菌和病毒之间的一类微生物，无细胞壁，具有可塑性，大小125-250nm，很少超过1.0μm。由于个体小，细胞膜又具有弹性，故往往能通过0.45μm滤膜，甚至还能通过比自己还小的滤器，G染色弱阴性，一般用姬姆萨染色（菌体呈淡紫色）。 霉形体最外层是细胞膜，由蛋白质与脂质组成的三层结构。内、外二层主要是蛋白质，中间层为脂质。在脂质中固醇约占36%。凡能作用于固醇的物质，如二性霉素B、皂素、毛地黄苷等能引起霉形体细胞膜的破坏而死亡。有的霉形体在细胞膜外还有一层由多聚糖构成的荚膜，有毒性，是霉形体的一种致病因素。 霉形体以二分裂繁殖为主，也见出芽、分枝或由球体延伸成长丝，然后分节段成为许多球状或短杆状的颗粒。 有的霉形体有一种特殊的顶端结构，能使霉形体粘附在宿主上皮细胞表面。这与霉形体在粘膜上的定植和致病有关。有些霉形体能运动，在霉形体内有许多微丝组织成网，和运动有关。在前进方向微丝成束，向前突出。也有认为顶端结构在表面上呈交替粘附和释放，造成霉形体在表面滑动。 霉形体和其他原核生物一样，基因组是一个环状双链DNA。分子量较小，只有大肠埃希菌的1/5，故其合成和代谢很有限。霉形体用普通染色不易着色，用Giemsa法染色着色很浅。革兰染色阴性。 三、培养特性 1．几种基质 在人工培养基上能生长，霉形体的营养要求比一般细菌高。除无胆甾原体外，培养基中必须加入10%~20%人或动物血清。 血清主要用于提供固醇和其他长链脂肪酸，不但是细胞膜合成需要，且具稳定细胞膜的作用。为抑制细菌生长，常加入青霉素、醋酸铊、叠氮钠等药物。 霉形体一般在pH7.8~8.0间生长，低于7.0则死亡。但溶脲脲原体最适的pH为6.0~6.5，因在培养时溶脲脲原体分解尿素产氨，可使培养基pH升高。当培养基指示剂变色即需移种，否则将迅速死亡。霉形体一般为兼性厌氧，仅个别菌株专性厌氧。有氧条件生长良好，在5％CO2和95％N2的环境中，生长为佳。适宜温度为36℃。霉形体生长缓慢，在含1.4%琼脂的固体培养基上孵育2~3d（有的需要2周）后才长出低倍显微镜下可见的微小菌落（10-600um）。典型的菌落呈荷包蛋样，核心较厚，向下长入培养基，周边为一层薄薄的透明颗粒区。有的整个菌落呈颗粒状。肺炎霉形体的菌落较大，直径100~150μm。溶脲脲原体的菌落最小，仅10~40μm，故曾称“T”株(tinystrain)。霉形体的菌落小，宜在低倍镜下观察。 液体培养基：成份要求复杂，且生长缓慢，一般都需要几天，在液体培养基中霉形体的生长量较少，且个体小，一般不易见到混浊，只有小颗粒沉于管底或混或者根本不变混浊。溶脲脲原体在生长量最大时每ml不超过106~107个菌落形成单位（CFU），故液体清亮。霉形体在固体和液体培养基中生长达高峰后，若继续培养，则很快死亡。在低温下可延长存活时间。在液体培养基中生长时，只有加入一些基质后，根据颜色变化来判断有无霉形体生长。加入的基质一般有葡萄糖、精氨酸等，加入0.002%酚红作为指示剂（四氮唑中不加入）。